| Диски с гиппуратом натрия | DD035 |
Используются для определения гидролиза гиппурата натрия микроорганизмами, главным образом, стрептококками.
Стрептококки группы В (Streptococcus agalactiae) и некоторые энтерококки могут гидролизовать гиппурат натрия с образованием глицина и бензоата натрия. Глицин дезаминируется окислителем нингидрином, который при этом восстанавливается, приобретая лиловую окраску. Среда для данного теста должна содержать только гиппурат, поскольку нингидрин реагирует с любой свободной аминокислотой (7, 20). Таким образом, стрептококки группы В можно отличить от стрептококков групп A, C, F и G, которые не гидролизуют гиппурат. Некоторые стрептококки группы D и единичные “зеленящие” стрептококки тоже гидролизуют гиппурат. Как впервые показали Ayers и Rupp (21), по способности гидролизовать гиппурат натрия можно дифференцировать гемолитические стрептококки человеческого и коровьего происхождения. Facklam и соавт. модифицировали методику для предварительной идентификации стрептококков групп А, В и D (18). Тест на гидролиз гиппурата является одним из способов отличить b -гемолитические стрептококки группы В коровьего происхождения от b -гемолитических стрептококков группы В, обычно выделяемых от человека (18). Определение ферментативного гидролиза гиппурата с образованием бензойной кислоты также помогает дифференцировать b -гемолитические стрептококки группы В от b -гемолитических стрептококков группы А и стрептококков группы D, не относимых к энтерококкам (19).
Для определения гидролиза гиппурата натрия соответствующий диск помещают в сердечно-мозговой бульон (М210), засеянный b -гемолитическими стрептококками, который затем инкубируют при 35°С в течение 48 ч. После инкубирования культуру центрифугируют и к 2 мл надосадочной жидкости, перенесенной в другую пробирку, добавляют 2 мл раствора хлорида железа. После тщательного встряхивания через 10 минут наблюдают формирование в прозрачной жидкости коричневого преципитата.
Приготовление раствора хлорида железа:
|
Ингредиенты
|
г/100 мл
|
|
Железа хлорид
|
12,0
|
|
Дистиллированная вода
|
94,6
|
|
Соляная кислота (конц.)
|
5,4 мл
|
Ход приготовления: добавить примерно 75 мл дистиллированной воды в мерную колбу на 100 мл, затем, не касаясь стенок колбы, добавить 5,4 мл соляной кислоты. Добавить 12 г хлорида железа, растворить его, осторожно подогревая колбу и тщательно перемешивая ее содержимое. Довести объем до 100 мл дистиллированной водой. Готовый раствор имеет оранжевую окраску.
Результаты теста на гидролиз гиппурата натрия у референс-штаммов
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Гидролиз гиппурата
|
|
Enterococcus faecalis (25212)
|
Обильный
|
+
|
|
Streptococcus agalactiae (4768)
|
Обильный
|
–
|
|
Streptococcus pyogenes (19615)
|
Обильный
|
+
|
Примечание:
+ положительный результат (появление коричневого преципитата через 10 мин после встряхивания смеси);
– отрицательный результат (преципитат, если и образуется, то при встряхивании он растворяется).
Диски хранить при 0…+8°С. Не используйте реактивы после истечения срока годности
ВНИМАНИЕ: материалы надо держать во влагонепроницаемых контейнерах с поглотителем влаги. Перед тем, как открыть контейнер, надо дать ему нагреться до комнатной температуры.