|
Нитратные диски
|
DD041
|
Используются в качестве субстрата для определения нитратредуктазной активности микроорганизмов.
Восстановление нитратов (NO3) до нитритов (NO2) и газообразного азота (N2) обычно происходит в анаэробных условиях, когда осуществляется т. н. нитратное дыхание – перенос электронов от окисляемого субстрата на нитраты (22). Большинство факультативных анаэробов для получения энергии в бескислородной среде пользуются нитратным или другими типами дыхания, при которых акцептором электронов является не кислород, а неорганические вещества (23).
Конечные продукты восстановления нитрата зависят от видовой принадлежности микроорганизма, но чаще конечным продуктом является молекулярный азот (23). Обычно эти продукты далее не участвуют в клеточном метаболизме и не окисляются, а выделяются в окружающую среду.
Данный тест предназначен для определения микробной нитратредуктазы, которая в присутствии подходящего окисляемого субстрата восстанавливает нитрат до нитрита. Появление нитрита определяют колориметрическими методами. Почти все энтеробактерии восстанавливают нитраты. Когда нитратредуцирующие культуры растут в присутствии диска, содержащего субстрат (нитрат калия), микробная нитратредуктаза восстанавливает его до нитрита, который можно определить с помощью специальных реактивов – a -нафтиламина (R009) и сульфаниловой кислоты (R015).
Асептически внести нитратный диск в 5 мл пептонной воды (М028), засеянной испытуемыми микроорганизмами, и инкубировать пробирку при 35°С в течение 18–24 ч. В качестве отрицательного контроля желательно использовать пробирку с незасеянной средой. Внести в пробирки после инкубирования по несколько капель каждого реактива. Развитие красного или розового окрашивания свидетельствует о присутствии нитрита и, следовательно, восстановлении нитрата.
Если после добавления реактивов окрашивание не развивается, в ту же пробирку вносят небольшое количество цинкового порошка, который химическим путем восстанавливает имеющийся в среде нитрат до нитрита, что способствует появлению розово-красного окрашивания, чем подтверждается истинно отрицательная реакция (17). Отсутствие окрашивания после добавления цинка свидетельствует об отсутствии нитрата (процесс восстановления уже миновал стадию нитрита, чем и объясняется ложноотрицательная реакция).
Реакции референс-штаммов:
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Восстановление нитрата
|
|
Acinetobactercalcoaceticus (19606)
|
Хороший
|
–
|
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Хороший
|
+
|
|
Escherichia coli (25922)
|
Хороший
|
+
|
|
Salmonella серовар Typhimurium (19615)
|
Хороший
|
+
|
Примечание:
+ положительный результат (появление красного или розового окрашивания среды);
– отрицательный результат (цвет среды не изменяется).
Диски хранить при 0…+8°С. Не используйте реактивы после истечения срока годности
ВНИМАНИЕ: материалы надо держать во влагонепроницаемых контейнерах с поглотителем влаги. Перед тем, как открыть контейнер, надо дать ему нагреться до комнатной температуры.