HiMedia: инструкцияпоприменениюпродукции По всем вопросам обращаться: Почтовый адрес: 124498, Москва, а/я 130. Офис: 123007, Москва, Хорошевское шоссе, д. 13 а, кор.3. Тел/Факс: +7 (495) 940 33 12, 940 33 13, 940 33 14,940 33 96, 940 33 97, 940 33 98. E-mail: himedia@himedialabs.ru Наш сайт: www.himedialabs.ru
Listeria Oxford Medium Base (Granulated) Основа Оксфордской среды для листерий (гранулированная форма) Продукция зарегистрирована в Министерстве здравоохранения Российской Федерации (ФСЗ 2009/03709).		Кат. № GM1145

Применение:

Рекомендуют для селективного выделения видов Listeria из патологического материала.

Состав**:	грамм/литр
Пептон специальный	23,00
Лития хлорид	15,00
Натрия хлорид	5,00
Крахмал кукурузный	1,00
Эскулин	1,00
Железа аммонийного цитрат	0,50
Агар-агар	10,00

Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 27.75 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Прокипятить до полного растворения среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45-50⁰С и асептически добавить растворенное содержимое 1 флакона с Оксфордской добавкой для листерий (FD71) или растворенное содержимое 1 флакона с  Моксалактамовой добавкой для листерий (FD126). Тщательно перемешать и разлить среду в стерильные чашки Петри.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: хлорид лития ядовит. Избегать прикосновения и вдыхания паров. При попадании на кожу немедленно смыть большим количеством воды.

Принцип и оценка результата:

Listeria monocytogenes - единственный представитель рода Listeria, который имеет значение как человеческий инфекционный агент. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связаны с болезнями животных. В любом случае, все разновидности патогенны для ягнят и телят. Положительный диагноз на листериоз может быть получен только при выделении и идентификации возбудителя из крови или из образцов CSF пораженных организмов. Оксфордская Питательная Среда для Листерий основывана на рецептуре, описанной Curtis и др. (1) для выделения L. monocytogenes из клинического материала и образцов продуктов питания. Специальный Пептон обеспечивает необходимые питательные вещества для микроорганизмов. Кукурузный крахмал нейтрализует образуемые токсичные метаболиты. Хлорид лития и антибиотики ингибируют грамотрицательные и большинство грамположительных микроорганизмов, но некоторые штаммы Staphylococci могут образовывать эскулин = отрицательные колонии. Циклогексимид используется для подавления грибкового загрязнения; цефотетан и фосфомицин - ингибиторы чрезмерного развития микрофлоры. Акрифлавин, колистина сульфат и хлорид лития ингибируют бактерии кроме разновидностей Listeria. Альтернативно может быть добавлен моксалактам (FD126), который ингибирует и грамположительные и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизирует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с трехвалентными ионами железа, что визуализируется как зоны почернения вокруг колоний.

Несмотря на то, что селективности питательной среды достаточно для выделения и дифференцирования при прямой поверхностной инокуляции, желательно предварительное разбавление инокулята, особенно когда образец сильно загрязнен. Методы выделения меняются в зависимости от материала для экспертизы (2). Для всех образцов рекомендуется селективное холодное обогащение (3, 4). Для фекальные и биологические образцы гомогенизируются в 0,1% Пептонной воде (M028), и, примерно, 0,1 мл непосредственно инокулируется на Селективную среду для Листерий или в Бульон для Селективного Обогащения и инкубируется при 30°C в течение 7 дней, а затем инокулируется на Селективной среду для Листерий. Для образцов из продуктов питания и экологических образцов обычно используется селективное обогащение.Для выделения Listeria из молока и молочных продуктов, добавьте 25 мл или 25 граммов образца к 225 мл Бульона обогащения для Листерий, UVM (M890A). Осторожно смешайте и гомогенизируйте. Инкубируйте в течение 48 часов в 30°C. Посейте штрихом обогащенные культуры на Оксфордскую питательную Среду для Листерий и инкубируйте аэробно в течение 48 часов при 37°C. Возьмите 5 типичных колоний (положительный эскулин) и инокулируйте на Триптон Соевый Агар с казеиновым переваром (GM290/M290).

Инкубируйте в течение 24 часов и затем используйте эти колонии для биохимической идентификации.

Контроль качества

Внешний вид порошка:

Светло-желтая к темно-желтой гранулированная питательная среда.

Консистенция готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,0%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

В чашках Петри гель темно-янтарного цвета, прозрачный, с легкой опалесценцией.

Кислотность среды:

При 25°C водный раствор (5,55% вес/об) имеет рН7.0±0.2

pH готовой среды: 6.80-7.20

Культуральные свойства:

Культуральные свойства референс-штаммов при   35-37°C через 24-48 часов при добавлении

Оксфордской Добавки для Листерий (FD071) или добавки Моксалактам Листерия (FD126).

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	инокулюм (КОЕ)	рост	восстановлено	Гидролиз эскулина
Bacillus subtilis 6633	>=10³	подавлен	0%
Enterococcus faecalis 29212	>=10³	подавлен	0%
Enterococcus hirae 10541	>=10³	подавлен	0%
Escherichia coli25922	>=10³	подавлен	0%
Listeria monocytogenes 19111	50-100	обильный	>=50%	положительно почернение среды вокруг колоний
Listeria monocytogenes 19112	50-100	обильный	>=50%	положительно почернение среды вокруг колоний
Listeria monocytogenes 19117	50-100	обильный	>=50%	положительно почернение среды вокруг колоний
Staphylococcus aureus 25923	50-100	хороший	40-50%	отрицательно
Интерпретация рост культуры как обильный, хороший, слабый, скудный или отсутствие роста, выраженный в % выросших колоний по отношение к количеству засеянных микроорганизмов: Рост культуры (посевная доза 10 2-10 3 КОЕ/мл):   % от засеянных Обильный: >70 %; Хороший: > 40 % но <70 %; Плохой: > 20 % но <40 %; Скудный – слабый: > 10 % но <20%; Скудный: > 10 %; Нет роста: нет видимых колоний

Условия и сроки хранения:

Сохранять при температуре ниже +30ºС в плотно закрытом контейнере. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2-8ºС.

Источники литературы:

1. Curtis G. D. W., Mitchell R. G, King A. F., Griffin E. J., 1989,Lett. Appl. Microbiol.,8:95

2. Van Netten P., Peroles I., Van de Mosdik A., Curtis G. D. W., Mossel D. A. A, 1988, Int. J. Food Microbiol., 6:187.

3. Hayes P. S, Feeley J. L, Groves L. M, Ajello G. W. and Fleming D. W, 1986, Appl. Environ. Microbiol., 51:438.

4. Fernandez G. J. F., Dominguez R. L., Vazzuez B. J. A., Rodriguez F.E. F., Briones D. V., Blanco L. J. L., Suarez F. G., 1986, Can. J. Microbiol., 32:149.