HiSafe Blood Culturing System
Одним из важнейших материалов, поступающих для исследования в микробиологическую лабораторию, является кровь. Известно, что в норме кровь стерильна, поэтому выделение гемокультуры имеет принципиальное значение для диагностики, в частности, таких состояний, как эндокардит, тифо-паратифозные заболевания и сальмонеллезы, пневмония, осложненный нагноением тромбофлебит, инфекции, связанные с пластикой сосудов и др. (1). Ввиду того, что концентрации микроорганизмов в крови при бактериемиях, как правило, невысоки, для посева необходимо брать достаточно большое количество крови. Естественная бактерицидная/бактериостатическая активность крови, наряду с предшествующей антибиотикотерапией, могут быть причиной отрицательного или несвоевременно полученного положительного результата исследования на гемокультуру (2). Соответственно, для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта можно применять такое вещество, как SPS (натрия полианетолсульфонат) (3, 4, 5). SPS подавляет активность стрептомицина (6), полимиксина В, канамицина и гентамицина. Полезность SPS для выделения гемокультур первыми показали Van Haebler и Miles.
Система для выделения гемокультур HiSafe предназначена для быстрого, эффективного и простого выделения гемокультур и их предварительной идентификации. Все питательные среды, входящие в систему ХайСейф (смотри ниже), специально разрабатывались для выращивания разнообразных клинически значимых микроорганизмов, как неприхотливых, так и прихотливых видов.
![]() ![]() |
Двухфазная система HiCombi для сальмонелл (слева - незасеянная система, справа - колонии сальмонелл на агаре после 24-часового инкубирования засеянной крови) |
Кровь у больного берут (предпочтительно до назначения антимикробной терапии) стерильным инструментом и асептично переносят во флакон системы HiSafe, содержащий соответствующую питательную среду (выбор среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя). Засеянные флаконы инкубируют в термостате и отмечают появление мутности, изменение цвета среды, гемолиза и/или газообразования.
Объем крови
|
Объем жидкой среды
|
Объем плотной среды
|
8-10 мл
|
70 мл
|
–
|
3-5 мл(у детей)
|
40 мл
|
20 мл
|
20 мл (у детей) | 7 мл | |
1-3 мл (у детей)
|
20 мл (у детей)
|
–
|
1. Подписывают флакон со средой для гемокультуры
2. Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки.
3. Открывшуюся часть резиновой пробки дезинфицируют.
4. Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного, как описано выше.
5. Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой.
6. Аэрация: используют стерильную вентиляционную иглу (LA038). На резиновую пробку флакона, установленного вертикально (желательно это делать в ламинарном боксе), помещают смоченный спиртом тампон и через него вводят во флакон вентиляционную иглу с фильтром. Введение и удаление иглы проводят по прямой линии. Иглу удаляют, а содержимое флакона осторожно перемешивают, перевернув флакон 2-3 раза.
Флаконы для культивирования анаэробов вентилированию не подлежат!
7. Инкубируют посевы при 35± 2° С 18-24 ч и далее, в течение 7 суток.
Признаки роста появляются обычно через 48 ч. Для подтверждения отрицательного результата флаконы продолжают инкубировать в течение 7 дней. Для идентификации выделенных гемокультур требуется посев на соответствующие дифференциальные среды.
Примечание: схемы идентификации выделенных гемокультур можно найти в соответствующих Руководствах (7 и др.).
Возможные причины ложного результата
На выделение гемокультуры оказывают влияние разные факторы:
Важные указания: используют только для диагностики in vitro.
Не использовать флаконы с трещинами или другими дефектами, а также с признаками контаминации питательной среды. Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121° С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку.
Представляет собой флакон (стеклянный или поликарбонатный) с комбинацией 7мл агара, омываемого 20 мл бульона (LQ033) 20 мл агара, омываемого 40 мл бульона (LQ012). Бульонные среды богаты факторами роста, что позволяет выращивать как факультативные, так и облигатные анаэробы, вызывающие бактериемию. Специальный пептон является источником различных аминокислот, дрожжевой экстракт – витаминов, а гемин и НАД являются факторами роста таких прихотливых микроорганизмов, как Haemophilus spp. Комбинированная среда рекомендуется для получения быстрого роста энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, стрептококков и грибов Candida.
Состав сред **
Твердая фаза:
Состав: (в грамм/литр) Специальный пептон 23,00 Дрожжевой экстракт 2,00 Глюкоза 1,00 Натрия хлорид 5,00 Натрия пируват 1,00 Смесь витаминов 1,00 Буфер 0,70 Агар 15,00 Карагенан 4,00 |
Жидкая фаза:
Состав: (в грамм/литр) Специальный пептон 23,00 Дрожжевой экстракт 2,00 Глюкоза 3,00 Натрия хлорид 5,00 Натрия пируват 1,00 Смесь витаминов 1,02 Буфер 1,90 СПС 0,25 |
Конечное значение рН (при 250С) 7,3±0,2
|
Конечное значение рН (при 250С) 7,3±0,2
|
1. Засеять среду, как описано для системы HiSafe.
2. Инкубировать при 35± 2° С в течение 4-6 ч. Наклонить систему так, чтобы поверхность агара была смочена бульоном.
НЕ ВСТРЯХИВАТЬ СИСТЕМУ И НЕ ДЕРЖАТЬ В НАКЛОННОМ ПОЛОЖЕНИИ БОЛЕЕ 15 СЕКУНД.
3. Придать системе вертикальное положение и инкубировать при 35± 2° С в течение 18-24 ч или дольше (при необходимости).
4. Для выделения культур аэробов можно применять аэраторы, как это описано для системы HiSafe.