Питательный желатин
|
Nutrient Gelatin
Питательный желатин |
M060
|
Среду рекомендуют для определения протеолитических свойств микроорганизмов в тесте разжижения желатина.
 |
Рост на питательном желатине (M060):
|
Состав**:
|
Ингредиенты
|
грамм /литр
|
|
Пептический перевар животной ткани
|
5,00
|
|
Мясной экстракт
|
3,00
|
|
Желатин
|
120,00
|
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,8 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 128,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до 50°С для полного растворения частиц. Разлить в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.
Принцип и оценка результата:
Питательный желатин готовят по прописи, используемой для санитарно-микробиологических исследований воды, стоков и других материалов (1). Разжижение желатины является важным тестом для дифференциации кишечных бактерий (2). Эту среду можно использовать также для подсчета микроорганизмов в воде чашечным методом.
Пептический перевар животной ткани и мясной экстракт обеспечивают присутствие в среде соединений азота, углерода, серы и микроэлементов, необходимых для роста неприхотливых микроорганизмов. Если у них имеется протеолитический фермент желатиназа, происходит разжижение желатина.
Чистые 18-24-часовые культуры с Трехсахарного железосодержащего агара (М021) или Среды Клиглера (М078) засевают уколом в пробирки с Питательным желатином. Для разжижения желатина многим видам требуется длительное инкубирование (3, 4). Желатин имеет плотную консистенцию при температурах ниже 20°С и жидкую – при 35°С и выше. Желатин разжижается при 28°С, поэтому посевы инкубируют при 35°С, но перед учетом результатов выдерживают их около 2 часов в холодильнике (3). Так как разжижение желатина происходит в верхних слоях среды, рекомендуется не встряхивать пробирки в ходе манипуляций (5). Для каждого исследования необходим контроль, так как желирующие свойства желатина заметно варьируют (3). Превышение концентрации 12% желатина может привести к подавлению роста микроорганизмов (6). Для подсчета микроорганизмов в воде чашечным методом инкубирование ведут при 20-22°С до 30 суток.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 12%-ному желатиновому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (12,8% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 1-7 дней при 35-37°С.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Желатиназа*
|
|
Bacillus subtilis (6633)
|
Хороший
или обильный |
+
|
|
**Clostridium perfringens (12924)
|
Хороший
или обильный |
+
|
|
Escherichia coli (25922)
|
Хороший
или обильный |
–
|
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Хороший
или обильный |
+
|
|
Proteus vulgaris (13315)
|
Хороший
или обильный |
+
|
Примечание:
* - для определения желатиназной активности охладить до температуры ниже 20°С;
** - в анаэробных условиях.
Ссылки:
1. American Public Health Association, 1975, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 14th ed., APHA, Washington, D.C.
2. Ewing, 1986, Edwards and Ewing’s Identification of Enterobacteriaceae, 4th ed., Elsevier Science Publishing Co., Inc. New York.
3. Cawan S. and Steel K., 1966, Manual for the Identification of Medical Bacteria, Cambrige University Press, Pg. 19, 27-28, 116 and 156.
4. Lautrop H., 1956, Acta Pathol. Microbiol. Scand., 39:357.
5. Frobisher M., 1957, Fundamentals of Microbiology, 6th ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, P:239.
6. Branson D., 1972, Methods in Clinical Bacteriology, Springfield, III, pg 21.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.