Dubos Broth Base
Основа бульона для микобактерий (по Дюбо) |
M067
|
Этот бульон со специальными добавками рекомендуют для приготовления жидкой среды, предназначенной для быстрого выращивания чистых культур Mycobacterium tuberculosis и близких к ним микроорганизмов.
Ингредиенты
|
грамм/
литр |
Гидролизат казеина
|
0,50
|
L-Аспарагин
|
2,00
|
Твин-80
|
0,20
|
Калия дигидрофосфат
|
1,00
|
Натрия гидрофосфат
|
2,50
|
Железа аммонийного цитрат
|
0,05
|
Магния сульфат
|
0,01
|
Кальция хлорид
|
0,0005
|
Цинка сульфат
|
0,0001
|
Меди сульфат
|
0,0001
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,6 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 1,3 г порошка в 180 мл дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина. Прокипятить (при необходимости) для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С и асептично добавить 20 мл стерильного бычьего альбумина V или стерильной сыворотки крови на каждые 180 мл бульонной основы.
Среда дана по прописи Dubos и соавт. (1) и является модификацией ранее предложенной среды (2, 3). Эту основу можно использовать для приготовления разнообразных сред, пригодных для быстрого выращивания туберкулезной палочки. Ценность такой среды в том, что ее можно использовать для изучения противотуберкулезных средств, приготовления инокулюма для заражения животных и т.п. Ее можно использовать в диагностических исследованиях спинномозговой жидкости или плеврального выпота, если предполагается присутствие микобактерий в чистой культуре.
Гидролизат казеина и L-аспарагин являются источником питательных веществ, неорганические соли – ионов, необходимых в метаболических процессах. Твин-80 служит источником жирных кислот для размножения микобактерий. Среда хорошо забуферена (4). Обогащенная сывороткой основа будет давать более обильный рост (в том числе при небольшой посевной дозе), по сравнению со средой, обогащенной альбумином. Кроме того, в присутствии сыворотки рост более дисперсный (в присутствии альбумина рост диффузный). Следует отметить, что ввиду высокой контагиозности микобактерий туберкулеза необходимо соблюдать особую осторожность при обращении с ними.
Гомогенный сыпучий светло-бежевый порошок.
Готовая среда имеет светло-желтую окраску, прозрачная, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (0,65% вес/об) с добавлением 1% глицерина имеет рН 6,6 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-6 недель при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Mycobacterium tuberculosis H37 Rv (25618)
|
Хороший или обильный
|
Mycobacterium kansasii (12478)
|
Хороший или обильный
|
Mycobacterium gordonae (14470)
|
Хороший или обильный
|
Mycobacterium avium (25291)
|
Хороший или обильный
|
Mycobacterium smegmatis (14468)
|
Хороший или обильный
|
1. Dubos, Fenner and Pierce, 1950, Am. Rev. Tuberc. Pulm Dis., 61,66.
2. Dubos and Davis, 1946, J. Exp., Med., 83:409.
3. Dubos and Middlebrook, 1947, Am. Rev. Tuberc., 56:334.
4. MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation - Cultivation - Identification - Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.