Агар для бруцелл с гемином и витамином К1

Эта среда с добавлением крови используется для выделения и культивирования анаэробов. Бруцеллы дают на ней обильный рост.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 43,1 г порошка (М1039 или М823) в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С, асептично добавить (до 5% об/об) стерильную дефибринированную баранью кровь. К среде М823 асептично добавить стерильный раствор витамина К1 (до конечной концентрации 10 мкг/мл). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Агар разработан для выделения и культивирования бруцелл из клинического материала. С введением в эту среду крови и таких питательных компонентов, как витамин К1, она становится пригодной для выращивания многих прихотливых микроорганизмов, включая анаэробов.

Модификацию с введением витамина К1 предложили Sutter и соавт. (1), после чего имели место другие модификации (2, 3). Данный агар разработан для культивирования и выделения бруцелл из клинического материала.

Среда богата питательными веществами, источником которых служат пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт и глюкоза. Кровь, введенная в среду, не только является питательным субстратом, но и позволяет выявить гемолитические реакции (4, 5). Присутствие гемина и витамина К1 необходимо для таких притязательных микроорганизмов, как бактероиды и клостридии (6). Инкубирование засеянной среды проводят в анаэробных условиях 35°С в течение, как минимум, 48 ч, причем отрицательный результат выдают не ранее, чем после 7 дней инкубирования.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтовато-коричневый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри или пробирках формируется гель. При добавлении стерильной дефибринированной крови (до 5% об/об) и раствора витамина К1 среда становится вишнево-красной.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М1039 или М823 (4,31% вес/об) имеют рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 48 ч при 35°С в анаэробных условиях.

Ссылки:

1. Sutter V.L., Citron D.M. and Finegold S.M., 1985, Wadsworth Anaerobic Bacteriology Manual, 4th ed., Star Publishing Co., Belmont, Ca.
2. Onderdonk A.B., Weinstein W.M., Sullivan N.M. and Bartlett J.G., 1974, Infect. Immun., 10:1256.
3. Weinstein W.M., Onderdonk A.B., Bartlett J.G. and Gorbach S.L., 1974, Infect. Immun., 10:1250.
4. Lennette, Balows, Hausler and Shadomy (Eds.), 1985, ‘Manual of Clinical Microbiology’, 4th ed., A.S.M., Washington, D.C.
5. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
6. Gibbons and MacDonald, 1960, J. Bacteriol., 80:164.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.