М-Агар Эндо
|
M-Endo Agar LES
М-Агар Эндо |
M1106
|
Эту среду используют для подсчета колиформных бактерий в воде двухэтапным мембранным методом.
 |
Метод мембранных фильтров.
|
Состав**:
|
Ингредиенты
|
грамм /литр
|
|
Гидролизат казеина
|
3,70
|
|
Пептический перевар животной ткани
|
3,70
|
|
Триптоза
|
7,50
|
|
Дрожжевой экстракт
|
1,20
|
|
Лактоза
|
9,40
|
|
Калия гидрофосфат
|
3,30
|
|
Калия дигидрофосфат
|
1,00
|
|
Натрия хлорид
|
3,70
|
|
Натрия дезоксихолат
|
0,10
|
|
Натрия лаурилсульфат
|
0,05
|
|
Натрия сульфит
|
1,60
|
|
Фуксин основной
|
0,80
|
|
Агар-агар
|
15,00
|
|
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 51,0 г порошка в 980 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 45°С и асептично добавить 20 мл 95%-ного этанола. Перемешать и разлить по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. При использовании больших чашек наливать такое количестве среды, чтобы образовался слой толщиной 1,5 мм. НЕ ДЕРЖАТЬ ЧАШКИ СО СРЕДОЙ НА СВЕТУ.
Предупреждение: основной фуксин является потенциальным канцерогеном, поэтому при обращении с ним следует избегать вдыхания порошка и попадания его на кожу.
Принцип и оценка результата:
Эта среда дана в прописи McCarthy, Delaney и Grasso (1) и используется для подсчета колиформных бактерий в воде (2).Метод мембранных фильтров для подсчета колиформных бактерий более достоверен и ценен, по сравнению с методом бродильных проб. Указанные выше авторы предложили использовать двухэтапный метод обогащения для уменьшения токсического воздействия окружающей среды на колиформные бактерии и повышения их выживания. Пропись данной среды основана на прописи Эндо, предложенной для дифференциации бактерий по способности ферментировать лактозу (3).
Гидролизат казеина, триптоза, пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ (особенно, азотистых) для роста колиформных бактерий. Лактоза является ферментируемым субстратом. Натрия дезоксихолат, сульфит натрия и основной фуксин подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты придают среде буферные свойства. Колиформные бактерии ферментируют лактозу, формируют красные колонии и окрашивают в тот же цвет среду вокруг них. Микроорганизмы, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии.
На первом этапе обогащения подложку смачивают Лаурил-триптозным бульоном (М080). Мембранный фильтр, через который пропущена исследуемая вода, асептично накладывают на подложку и без переворачивания инкубируют 2 ч при 35°С во влажной камере. Затем фильтр асептично переносят на М-Агар Эндо в чашке и инкубируют при той же температуре в течение 24 ч. В другом варианте подложку для мембранного фильтра помещают на внутреннюю поверхность крышки чашки с М-Агаром Эндо, смачивают 2 мл Лаурил-трпитозного бульона (М080) и инкубируют 1-1,5 ч при 35°С. На втором этапе подготовленный фильтр перекладывают прямо на поверхность агара и инкубируют, как описано выше. Через 24 инкубирования предположительно колиформные бактерии формируют золотисто-зеленые колонии с металлическим блеском.
Определение концентрации колиформных бактерий: отмечают общее количество колиформных бактерий на 100 мл исследуемой воды. При обнаружении на фильтре 20-80 колоний (но не более 200) можно экстраполировать результат исследования по следующей формуле.
Количество колиформных в 100 мл = кол-во колоний колиформ х 100 : кол-во профильтрованной воды.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий розовый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет красную окраску, слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (5,1% вес/об с 2% об/об этанола) имеет рН 7,2 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 20-24 ч при 35°С.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
Красные или черные с блеском
|
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Красные или черные с блеском
|
|
Salmonella typhi (6539)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Подавляется
|
–
|
Ссылки:
1. McCarthy J.A., Delaney J.E. and Grasso R., 1961, Water and Sewage Works, 108:238.
2. American Public Health Association, 1980, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 15th ed., APHA, Inc., Washington, D.C.
3. Endo, 1904, Zentrabl. Bakteriol. Abt. I. Orig., 35:109.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить не рекомендуется.