Mannitol Salt Agar Солевой агар с маннитом	M118
Mannitol Salt Broth Солевой бульон с маннитом	М383

 

Эти среды используют в качестве селективных для выделения клинически значимых культур стафилококков.

Рост Staphylococcus aureus на солевом агаре с маннитом (M118)

 

Состав**:

Ингредиенты	М118 грамм/литр	М383 грамм/литр
Протеозопептон	10,00	10,00
Мясной экстракт	1,00	1,00
Натрия хлорид	75,00	75,00
D-Маннит	10,00	10,00
Феноловый красный	0,025	0,025
Агар-агар	15,00	–
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 111,0 г порошка М118 или 96,0 г порошка М383 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. При желании к среде М118 можно добавить (до 5% об/об) эмульсию яичного желтка (FD045). Тщательно перемешать и разлить в соответствующие емкости.

Принцип и оценка результата:

Эти среды готовят в соответствии с прописью Чэпмена (1) и используют в качестве селективных для выделения клинически значимых культур стафилококков. Их рекомендуют для определения и подсчета коагулазоотрицательных стафилококков в молоке (2), пищевых продуктах (3) и другом материале. Для оценки микробной обсемененности материалов использование этих сред регламентируется американской Фармакопеей (4).

Среды содержат протеозопептон и мясной экстракт, что делает их очень питательными ввиду содержания необходимых ростовых факторов. Вместе с тем рост бактерий, кроме стафилококков, подавляется высокой концентрацией (7,5%) хлорида натрия. Маннит является ферментируемым и дифференцирующим субстратом, а также источником углерода. Штаммы Staphylococcus aureus, вырастающие на этой среде, ферментируют маннит и образуют желтые колонии, окруженные зоной пожелтения среды. Большинство коагулазоотрицательных стафилококков и микрококков не ферментируют маннит и растут, образуя мелкие красные колонии, окруженные красной или лиловой зоной. Цвет среды и колоний определяется реакцией индикатора фенолового красного, который при рН 8,4 имеет красный, а при рН 6,8 – желтый цвет. В случае добавления (до 5% об/об) эмульсию яичного желтка (FD045) на среде можно определять не только ферментацию маннита, но и липазную активность микроорганизмов. Эмульсия в солевой среде становится прозрачной, поэтому при наличии липазной активности вокруг колоний формируется желтая непрозрачная зона (5). Колонии предположительно Коагулазоположительных стафилококков окружены яркими желтыми зонами, тогда как колонии непатогенных стафилококков образуют колонии с красновато-лиловыми зонами.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М118).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М118 (11,1% вес/об) или М383 (9,6% вес/об) имеют рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет колоний на среде М118
Staphylococcus aureus (25923)	Хороший или обильный	Желтые
Staphylococcus epidermidis (12228)	Средний или хороший	Красные
Escherichia coli (25922)	Подавляется	–

Ссылки:

1. Chapman G.H., 1945, J. Bact., 50:201.
2. Marshall R. (Ed.), 1992, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 16th ed., APHA, Washington, D.C.
3. Bacteriological Analytical Manual, 1995, Food and Drug Administration, 8th ed., AOAC, International, U.S.A.
4. The United States Pharmacopeia, 1985, 21st rev., U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, MD.
5. Gunn B.A., Dunkelberg W.E. and Creitz J.R., 1972, Am. J. Clin. Path., 57:236.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.