Columbia Blood Agar Base Основа колумбийского кровяного агара	М144
Columbia Blood Agar Base with 1% Agar Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара	M144A

 

Эта среда используется в качестве эффективной основы для приготовления кровяного, шоколадного агаров, а также различных селективных и дифференциальных сред.

 

Рост колоний Staphylococcus aureus на колумбийском агаре (M144)

 

Состав**:

Ингредиенты	М144 грамм/литр	М144А грамм/литр
Пептон (специальный)	23,00	23,00
Крахмал кукурузный	1,00	1,00
Натрия хлорид	5,00	5,00
Агар-агар	15,00	10,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 44,0 г порошка М144 или 39,0 г порошка М144А в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 40-50°С и асептично внести указанные ниже термочувствительные ингредиенты.

Для приготовления кровяного агара: стерильную дефибринированную кровь барана (до 5% об/об).

Для приготовления шоколадного агара: стерильную дефибринированную кровь барана (до 10% об/об), прогреть при 80°С в течение 10 мин при постоянном помешивании.

Среду можно сделать селективной путем добавления к стерильной основе различных антимикробных веществ (специальных добавок).

Для культивирования бруцелл: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька с селективной добавкой для бруцелл (FD161).

Для культивирования кампилобактеров: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька с одной из селективных добавок для кампилобактеров (FD006, FD165, FD008, FD090 или FD106) и 1 пузырька с ростовой добавкой для кампилобактеров (FD009).

Для культивирования гарднерелл: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька с селективной добавкой для гарднерелл (FD056).

Для культивирования стрептококков: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька со стрептококковой добавкой (FD030 или FD031).

Тщательно перемешать и разлить среду в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Эту среду разработали Ellner и соавт.(1). Присутствие специального пептона обеспечивает быстрый и обильный рост на ней даже прихотливых микроорганизмов. Кроме того, на ней вырастают типичные колонии, лучше проявляется пигментообразование и более четкие гемолитические реакции. Колумбийский агар используют для приготовления кровяных и селективных сред с различными сочетаниями антибиотиков.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и одновременно нейтрализует токсические метаболиты. Баранья кровь позволяет оценить способность микробов к гемолизу и обеспечивает их гемином (Х фактором), который необходим для роста многих бактерий. Вместе с тем в среде нет фактора V (никотинамидадениндинуклеотида), поэтому Haemophilus influenzae, имеющие потребность в обоих факторах (Х и V), на этой среде расти не будут. Ввиду относительно высокого содержания углеводных компонентов бета-гемолитические стрептококки могут давать на этой среде зеленоватые зоны гемолиза, которые можно ошибочно принять за альфа-гемолиз. В этой связи для подтверждения требуется проведение дополнительных тестов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному (М144) или 1%-ному (М144А) агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. После добавления к основе стерильной дефибринированной крови (до 5% об/об) среда имеет вишнево-красный цвет и опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М144 (4,4% вес/об) или М144А (3,9% вес/об) имеют рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35-37°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)	Рост	Гемолиз
Neisseria meningitidis (13090)	Обильный	–
Staphylococcus aureus (25923)	Обильный	Бета или гамма
Staphylococcus epidermidis (12228)	Обильный	Гамма
Streptococcus pneumoniae (6303)	Обильный	Альфа
Streptococcus pyogenes (19615)	Обильный	Бета

Ссылки:

1. Ellner, Stoessel, Drakeford and Vasi, 1966, Am. J. Clin. Pathol., 45:502

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.