Хромогенный агар/бульон для колиформных бактерий и Е. coli
| Rapid HiColiform Agar Хромогенный агар для колиформных бактерий и Е. coli |
M1465 |
| Rapid HiColiform Broth Хромогенный бульон для колиформных бактерий и Е. coli |
M1453 |
Эти среды используют для быстрого и простого обнаружения в воде всех колиформных бактерий и отдельно - Е. coli по реакциям хромогенного и флюоресцентного субстратов.
 |
Рост Escherichia coli и Enterobacter aerogenes на агаре Rapid HiColiform Agar (M1465): под ультрафиолетовым облучением колонии Escherichia coli дают голубоватое свечение (флюоресценция).
|
Состав*
|
Ингредиенты
|
M1465
грамм/литр |
M1453
грамм/литр |
|
Пептон специальный
|
5,00
|
5,00
|
|
Натрия хлорид
|
5,00
|
5,00
|
|
Сорбит
|
1,00
|
1,00
|
|
Калия гидрофосфат
|
2,70
|
2,70
|
|
Калия дигидрофосфат
|
2,00
|
2,00
|
|
Натрия додецилсульфат
|
0,10
|
0,10
|
|
Хромогенный субстрат
|
0,08
|
0,08
|
|
Флюорогенный субстрат
|
0,05
|
0,05
|
|
IPTG
|
0,10
|
0,10
|
|
Агар-агар
|
15,00
|
-
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,8 ± 0.2
*Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 16,0 г порошка М1453 (32,0 г – для бульона двойной концентрации) или 31,0 г порошка M1465 в 1000 мл дистиллированной воды. При необходимости, подогреть для полного растворения частиц. Разлить в соответствующие емкости и стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.
Принцип и оценка результата:
Данные среды представляют собой модификацию бульона LMX, описанного M. Manafi и W. Kneifel (2), и рекомендуются для одновременного обнаружения колиформных бактерий и кишечных палочек.
Специальный пептон содержит большое количество триптофана, необходимого как для роста бактерий, так и для обнаружения индолообразования. Сорбит является источником атомов углерода. Фосфаты придают среде буферные свойства, необходимые для быстрого роста колиформных бактерий. Додецилсульфат натрия подавляет рост сопутствующей микрофлоры, особенно грамположительных бактерий. Флюорогенный субстрат расщепляется характерным для Escherichia coli ферментом β-D-глюкуронидазой: в результате появляется голубая флюоресценция при ультрафиолетовом облучении микробного роста (Рис. Б). Общие колиформные бактерии определяют по сине-зеленой окраске бульона вследствие расщепления хромогенного субстрата (Рис. А). Компонент IPTG усиливает синтез ферментов и повышает активность β-D-глюкуронидазы. Для подтверждения присутствия E. coli на поверхность бульона наносят реактив Ковача. При положительной реакции он в течение 2 мин становится красным. В случае агаровой среды 2-3 капли реактива Ковача наносят на подозрительную колонию, которая при положительной реакции в течение 2 мин также становится красной.
 |
Рис. А. Сине-зеленый цвет при дневном свете свидетельствует о присутствии общих колиформных
|
 |
Рис. Б. Флюоресценция в полной темноте под ультрафиолетовым облучением свидетельствует
|
Контроль качества:
Внешний вид:
Гомогенный сыпучий порошок светло-желтого цвета.
Плотность готовой среды:
По плотности соответствует 1,5 % агаровому гелю (М1465).
Цвет и прозрачность готовой среды:
В чашках Петри формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель, а в пробирках - бульон светло-желтого цвета.
Кислотность:
При 25°С 1,6 %-й (вес/об) водный раствор М1453 и 3,1 %-й (вес/об) водный раствор М1465 имеют рН 6,8 ± 0.2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
|
Штаммы микроорганизмов (ATCC)
|
Цвет колоний
|
Флюоре
сценция* |
Образо
вание индола |
|
Enterbacter aerogenes (13048)
|
Сине-зеленые
|
-
|
-
|
|
Escherichia coli (25922)
|
Сине-зеленые
|
+
|
+
|
Примечания: + = положительная реакция; - = отрицательная реакция;
* наличие флюоресценции при ультафиолетовом облучении
Ссылки:
1. Hahn G. and Wittrock Е., (1991), Acta Microbiologica Hungarica 38(3-4):265-271.
2. Manafi M. and Kneifel W., (1989), Zbt. Hygiene and Umweltmedizin 189:225-234.
3. Manafi M., (1990), Forum Sadte-Hygiene 41:181-184.
4. Manafi М., (1991), Ernahrung / Nutrition, 15, Nr. 10.
5. Manafi M. and Kneifel W., (1991), Acta Microbiologica Hungarica 33(3-4):293-304.
6. Manafi M., Kneifel B. and Bascon S., (1991), Microbiol. Rev., 55:335-348.
Условия и сроки хранения:
Хранить порошок при температуре ниже 8°С в плотно закрытой таре.
Использовать до даты, указанной на этикетке.