| Lowenstein Jensen Medium Base w/o Starch Основа среды Левенштейна–Йенсена без крахмала |
М1542 |
|
Ингредиенты
|
грамм/литр
|
|
L-Аспарагин
|
3,60
|
|
Калия дигидрофосфат
|
2,40
|
|
Магния сульфат
|
0,24
|
|
Магния цитрат
|
0,60
|
|
Малахитовый зеленый
|
0,40
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 7,24 г порошка в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина (для некоторых видов микобактерий глицерин не добавлять). Прокипятить до полного растворения компонентов среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (1210С) в течение 15 мин. Приготовить стерильно 1000 мл эмульсии яиц. Асептически смешать 600 мл основы среды и 1000 мл яичной эмульсии до однородного состояния. Внести добавку Графта (Gruft Micobacterial Supplement FD053), если это необходимо. Разлить по пробиркам. Поместить пробирки в наклонном положении для формирования скошенной среды и прогревать (для коагуляции) при 850С в течение 45 мин.
Оригинальная пропись Левенштейна (1) была модифицирована Йенсеном (1), а Графт изменил среду добавлением двух антимикробных агентов (3,4). Основа среды Лвенштейна-Йенсена без крахмала рекомендована ВОЗ для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам. Среда Левенштейна-Йенсена без картофельного крахмала, с внесенными в нее препаратами, модифицирована и рекомендована для применения Международным союзом против туберкулеза. Среда, приготовленная на яичной основе, поддерживает рост различных видов микобактерий. Малахитовый зеленый, бензилпенициллин и налидиксовая кислота предотвращают рост большинства представителей сопутствующей флоры, в первую очередь той флоры, которая дает рост много раньше, чем микобактерии. РНК действует как стимулятор роста и позволяет повысить уровень высеваемости. Если могут быть выделены культуры бычьего или других глицерофобных видов микобактерий, глицерин добавлять не нужно. Малахитовый зеленый является не только ингибитором роста, но и pH-индикатором. Появление синих зон указывает на повышение кислотности за счет роста грамположительных контаминантов (например, Streptococcus spp.), желтые зоны выявляют контаминацию грамотрицательными бациллами.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий порошок зеленовато-синего цвета.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет светлый голубовато-зеленый цвет с гладкой, слегка опалесцирующей поверхностью.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-4 недели при 350С в атмосфере 5 - 10% углекислого газа.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Среда Левенштейна-Йенсена
|
С добавкой Графта
|
|
M.tuberculоsis H37RV (25618)
|
Обильный рост, колонии гранулированные, неровные, бородавчатые, сухие, рыхлые
|
Нет роста
|
|
M.kansasii(12478)
|
Обильный рост, колонии фотохромогенные, от гладких
до неровных |
Нет роста
|
|
M.gordonae(14470)
|
Обильный рост, колонии гладкие, желтые и оранжевые
|
Нет роста
|
|
M.avium(25291)
|
Обильный рост, колонии гладкие,
не пигментированные |
Нет роста
|
|
M.smegmatis(14468)
|
Обильный рост, колонии морщинистые, слизистые, белые
|
Рост хороший или обильный,
колонии морщинистые, слизистые, белые |
1.Lowenstein E., 1931, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 120:127.
2.Jensen K.A., 1932, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 125:222.
3.Jensen K.A., Towards, a standardization of Laboratoy methods. Second report of the Sub committee of laboratory methods of the IUAT. BILL Int Union Tuberc. 1955:25 (1-2): 89-104.
4.World Health Organization laboratory services in tuberculosis control, part III culture. Geneva 1998: Publication No. WHO/TB/98:258.
5.International Unit Against Tuberculosis and Lung Disease.Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. Minimum requirments. Role and operation in low-income country, Paris 1998.
Порошок хранить при температуре ниже 30 °С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре 2…8°С.