количество
посетителей
0

 

 

 

 

 

 

 

 

Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI)

Untitled Document

Mueller Hinton Agar, Modified (as per CLSI for antifungal)
Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI)  

M1825

Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI) рекомендуется для изучения чувствительности дрожжей и грибков к антимикотикам диско-диффузионным методом.

Состав**:

Ингредиенты:

грамм/литр

Мясной настой
Казеина кислотный гидролизат
Крахмал
Глюкоза
Метиленовый синий
Агар-агар
рН (при 25ºС)

300,00
17,50
1,00
20,00
0,0005
17,00
7,3 ± 0,1

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам 

Приготовление:

Размешать 58,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Довести до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при давлении 1,1 атм (121ºС) в течение 15 мин. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

  1. Состав среды Мюллер и Хинтон был первоначально разработан как простая, прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных культур (1). Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI) рекомендуется для диффузии антигрибковых агентов, которыми пропитаны бумажные диски, в агаровый гель, как описано в стандарте CLSI (2).

Kirby-Bauer рекомендовали агар Мюллер Хинтон для тестов определения чувствительности с использованием одного диска с высокой концентрацией (4). Комитет ВОЗ по стандартизации определения чувствительности принял агар Мюллер Хинтон для определения чувствительности микроорганизмов в связи с воспроизводимостью результатов тестирования на этой среде (3). Агар Мюллер Хинтон с добавлением 5% бараньей крови или гемоглобина был рекомендован для определения чувствительности S.pneumoniae и H.influenzae. Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI) рекомендуется для изучения чувствительности дрожжей и грибков к антимикотикам диско-диффузионным методом.
Мясной настой и кислотный гидролизат казеина являются источником азотистых соединений, углерода, серы и других необходимых компонентов. Крахмал, коллоидный протектор, обеспечивает защиту от токсичных субстанций, выделяемых в среду микроорганизмами в процессе роста. Крахмал гидролизуется, образуя декстрозу, являющуюся источником энергии, как и глюкоза. Метиленовый синий позволяет получить четкие границы зоны задержки роста.

Методика:

Приготовление инокулома:

  1. Взять суточную культуру (24 часа при 35±20С), выращенную на среде Сабуро декстрозный агар (M063). Снять со среды пять колоний диаметром около 1 мм и суспензировать в 5 мл 0,85% NaCl.
  2. Перемешать суспензию и довести ее плотность до 0,5 единиц McFarland (1х106 – 5х106 КОЕ).

Проведение исследования:

  • Приготовить чашки со средой Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI). Толщина слоя агара в чашках должна быть 4 мм.
  • Стерильным, не токсичным хлопковым тампоном на деревянной палочке нанести суспензию микроорганизмов штрихами на поверхность агара в трех направлениях (поворачивая чашку на 600). Оставить чашку с закрытой крышкой на 5 – 15 минут для подсушивания при комнатной температуре.
  • Разложить диски с антимикотиками на поверхность засеянного агара так, чтобы расстояние между центрами дисков было не менее 24 мм (не более 12 дисков на чашку диаметром 150 мм или не более 5 дисков на 100 мм чашку).
  • Перевернуть чашку вверх дном и поместить в термостат при 35±20С не позднее, чем через 15 минут после наложения дисков.
  • Достоверные результаты можно получить при образовании на чашках почти сливного роста культуры и равномерно круглых зон задержки роста. Если этого не наблюдается через 20 – 24 часа роста, то учитывать результаты нужно через 48 часов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий порошок от желтого до светло-желтого цвета с легким голубоватым оттенком.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,7%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
После остывания до комнатной температуры среда прозрачна, опалесцирует и имеет янтарную окраску.
Кислотность среды:
При 25ºС водный раствор (5,8 % вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,1.

Культуральные свойства:
Наилучший рост указанных тест-культур был получен на среде Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI) при инкубации в течение 24-48 часов при 33-370С, также как и образование зон задержки роста.
Культуры, применяемые для контроля качества дисков с антимикотиками:

  1. C. albicans ATCC 90028*
  2. C. parapsilosis ATCC 22019*
  3. C. tropicalis ATCC 750*
  4. C. krusei ATCC 6258*
  5. C. albicans ATCC 10231
  6. S. cerevisiae ATCC 9763

* Контрольные культуры в соответствие со стандартом CLSI

Интерпретация размеров зон задержки роста

№ по ката-логу
Антимикотик 

Сим-
вол

Содер-
жание в диске (мкг)

  Диаметр зоны (мм)

  Контроль

R
(мм) или менее
S-DD*
S
(мм) или более

C.albicans
ATCC 90028

C .parapsilosis
ATCC 22019

C.tropicalis
ATCC 750

C.krusei
ATCC 6258

C.albicans
ATCC 10231

S.cerevisiae
ATCC 9763

SD111
Амфотерицин В
AP
100 ЕД
-
-
-
10-17
11-20
8-12
9-14
10-18
11-18
SD233
Амфотерицин В
AP
20 мкг
-
-
-
10-15
10-17
8-10
8-12
10-16
8-12
SD270
Амфотерицин В
AP
50 мкг
-
-
-
12-15
13-17
13-17
14-20
15-23
16-25
SD115
Клотримазол
CC
10 мкг
-
-
-
18-32
16-30
10-20
14-24
12-18
17-25
SD114
Флюконазол
FU
10 мкг
-
-
-
27-38
22-33
16-25
-
18-22
-
SD232
Флюконазол
FU
25 мкг
14
15-18
19
28-39
22-33
26-37
-
25-30
-
SD221
Итраконазол
IT
10 мкг
-
-
-
16-20
11-18
8-13
8-15
18-22
-
SD276
Итраконазол
IT
30 мкг
-
-
-
18-22
20-24
11-18
8-15
18-22
-
SD224
Кетоконазол
KT
10 мкг
-
-
-
20-32
14-29
17-28
10-14
18-22
-
SD275
Кетоконазол
KT
30 мкг
-
-
-
32-36
26-32
26-32
19-26
31-40
-
SD274
Кетоконазол
KT
50 мкг
-
-
-
37-45
36-44
27-34
19-26
31-40
-
SD273
Миконазол
MIC
30 мкг
-
-
-
22-26
13-17
14-20
19-26
20-27
20-28
SD272
Миконазол
MIC
50 мкг
-
-
-
26-32
23-29
14-20
19-26
20-27
20-28
SD025
Нистатин
NS
100 ЕД
-
-
-
19-27
16-25
16-21
15-20
15-23
17-25
SD271
Нистатин
NS
50 мкг
-
-
-
19-23
19-23
13-17
19-26
16-25
22-27
SD277
Вориконазол
VOR
1 мкг
13
14-16
17
31-42
28-37
-
16-25
30-40
29-38

S-DD* - Дозозависимая
Красным цветом выделены результаты в соответствие со стандартом CLSI.

Интерпретация размеров зон задержки роста при использовании МИК-теста
на среде Агар Мюллера-Хинтона (модифицированный, для определения чувствительности к антимикотикам, по стандарту CLSI)

№ по ката-
логу
Антимикотик
Сим-
вол
Диа-
пазон (мкг)

Критерии интерпретации

для Candida spps 

Контроль качества
S
 S-DD*
R ≥
C.albicans 
ATCC 10231 
C.tropicali
ATCC750
C.krusei 
ATCC 6258
C.paraps ilosis 
ATCC 22019
C.albicans 
ATCC  90028
MD071
Амфотерицин В
AP
A:32-0.25
Не исследовано
0.125-0.5
0.25-1
0.5-2
0.064-0.25
0.016-0.25
B: 0.256-0.002
MD072
Флюконазол
FLC
A: 256-2
8
16-32
64
0.125-0.5
1-8
-
4-16
0.5-8
B: 2.048-0.016
MD073
Итраконазол
IT
A:32-0.25
0.12
0.25-0.5
1
0.064-0.25
0.064-0.25
0.25-1
0.032-1
0.016-0.25
B: 0.256-0.002
MD074
Кетоконазол
KT
A: 32-0.25
Не исследовано
0.008-0.032
0.032-0.125
0.25-1
0.032-2
0.004-1
B: 0.256-0.002

S-DD* - Дозозависимая
Красным цветом выделены результаты в соответствие со стандартом CLSI.

Литература:

  1. Mueller J. H. and Hinton J., 1941, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 48:330.
  2. Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibilty Testing of yeasts; Approved Guideline Second Edition M44-A2 Vol.24 No.17.
  3. Present Status and Future Work, WHO Sponsored collaborative study, Chicago, Oct. 1967.
  4. Bauer A. W., Kirby W. M., Sherris J. L. and Turck M., 1966, Am. J. Clin. Pathol., 45:493.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +30ºС. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8ºС