PKU Test Agar Base
Основа агара для теста на фенилкетонурию |
M282
|
Agar with Thienylalanine Агар с тиенилаланином |
M398 |
Этот агар рекомендован для оценки содержания фенилаланина в крови при определении фенилкетонурии (ФКУ).
Ингредиенты
|
М282
грамм/литр |
М398
грамм/литр |
L-Глютаминовая кислота
|
0,50
|
0,50
|
DL-Аланин
|
0,50
|
0,50
|
Аспарагин
|
0,50
|
0,50
|
Глюкоза
|
10,00
|
10,00
|
Калия гидрофосфат
|
15,00
|
15,00
|
Калия дигидрофосфат
|
5,00
|
5,00
|
Аммония хлорид
|
2,50
|
2,50
|
Аммония нитрат
|
0,50
|
0,50
|
Натрия сульфат
|
0,50
|
0,50
|
Магния сульфат
|
0,05
|
0,05
|
Марганца хлорид
|
0,005
|
0,005
|
Железа хлорид
|
0,005
|
0,005
|
Кальция хлорид
|
0,0025
|
0,0025
|
В-2-Тиенилаланин
|
–
|
0,0033
|
Агар-агар
|
15,00
|
15,00
|
Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2
|
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 50,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 50°С, добавить споры Bacillus subtilis и 3,3 мг В-2-тиенилаланина (к среде М398). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.
Эта среда разработана Demain (1). Guthrie и Tieckelmann (2, 3, 4) модифицировали тест подавления для исследования образцов крови новорожденных с целью раннего выявления фенилкетонурии при низких уровнях фенилаланина в крови путем определения уровней сывороточного фенилаланина или уровня фенилпирувата в моче. ФКУ является врожденным дефектом, вызванным отсутствием фермента фенилаланингидроксилазы. При этом состоянии фенилаланин накапливается в крови и выделяется с мочой (фенилкетонурия), развивается повреждение мозга и замедляется развитие индивидуума. Данный агар является синтетической средой определенного состава, в который добавляется В-2-тиенилаланин. Он является агаровой основой для проведения тестов с образцами крови. Этот тест основан на том, что рост бактерий Bacillus subtilis обычно подавляется в присутствии В-2-тиенилаланина, но при добавлении в среду L-фенилаланина отмечается хороший рост (в результате конкурирующего влияния L-фенилаланина). Уровень фенилаланина в крови можно определить по наличию роста указанной культуры. Кроме фенилаланина могут быть использованы пролин, фенилпируват или фениллактат.
Небольшие диски фильтровальной бумаги, пропитанные кровью пациента, укладывают на данный агар с В-2-тиенилаланином, засеянный культурой Bacillus subtilis. Контрольные диски, пропитанные различными концентрациями L-фенилаланина (2, 4, 6, 8, 10, 12 и 20 мг%) также укладывают на ту же среду. После инкубирования в течение ночи сравнивают диаметры зон роста вокруг опытного и контрольных дисков. Зона, соответствующая уровню 4 мг% или более, оценивается как предварительный положительный результат. Повторные исследования с двойными дисками, химическое или спектрофотометрическое исследования позволяют уточнить результат (5, 6).
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водные растворы М282 или М398 (5,0% вес/об) имеют рН 7,0 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штамма через 12-16 ч при 35-37°С.
Штамм микроорганизмов (АТСС)
|
Концентрация фенилаланина (мг%)
|
Рост
|
Bacillus subtilis (6633)
|
2
|
Слабый
или отсутствует |
Bacillus subtilis (6633)
|
4
|
Обильный
|
Bacillus subtilis (6633)
|
6
|
Обильный
|
Bacillus subtilis (6633)
|
8
|
Обильный
|
Bacillus subtilis (6633)
|
10
|
Обильный
|
Bacillus subtilis (6633)
|
12
|
Обильный
|
1. Demain A.L., 1958, J. Bact., 75:517.
2. Guthrie R., 1961, J.Am. Med. Assoc., 178:863.
3. Guthrie R and Tieckelmann H., 1960, London Conference on the Scientific study of Mental Deficiency, London.
4. Guthrie and Susi, 1963, Pediatrics, 32:338.
5. Ambrose J., et al, 1967, Clin. Chem. Acta., 15:493.
6. Ambrose J., 1969, Clin. Chem., 15:15.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить не рекомендуется.