Печать


Charcoal Agar Base / Charcoal Blood Agar Base / Charcoal Agar with Niacin
Основа угольного агара для бордетелл / Основа кровяно-угольного агара для бордетелл / Угольный агар с ниацином для бордетелл
М344 / M646 / M1053

 

Угольный агар с добавками рекомендуют для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины и также для сохранения лабораторных культур этих микроорганизмов.

Состав**:

Ингредиенты
М344
грамм/литр
М646
грамм/литр
М1053
грамм/литр
Настой говяжьего сердца
500,00
Пептический перевар животной ткани
10,00
10,00
Панкреатический перевар желатина
10,00
Мясной экстракт
10,00
10,00
Дрожжевой экстракт
3,50
3,50
Натрия хлорид
5,00
5,00
5,00
Крахмал растворимый
10,00
10,00
10,00
Уголь
4,00
4,00
4,00
Никотиновая кислота
0,001
0,01
Агар-агар
18,00
12,00
12,00
Конечное значение рН (при 25°С)
7,3 ± 0,2
7,5 ± 0,2
7,4 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 31,25 г порошка М344 в 450 мл или 54,50 г порошка М646 или 51,00 г порошка М1053 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить при постоянном помешивании для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45-50°С. Асептично внести 50 мл стерильной дефибринированной крови и селективную добавку для бордетелл (FD004) в среду М344 или в среду М1053. В среду М646 (на каждые 100 мл) добавить 10 мл стерильной дефибринированной лошадиной крови, 0,3 мл стерильного раствора пенициллина (100 ЕД/мл) и 0,3 мл 0,1%-ного раствора 4,4-диамидодифениламина гидрохлорида.

Принцип и оценка результата:

Угольный агар соответствует прописи, предложенной для метода Mishulow и соавт.(1), и рекомендуется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины. Потребность в никотиновой кислоте, как ростовом факторе, показана Proom (2). Для производства коклюшной вакцины Ensminger и соавт.(3) заменили среду Борде-Жангу на угольный агар.

Такие компоненты, как настой говяжьего сердца, мясной и дрожжевой экстракты, желатиновый пептон, дают необходимые питательные вещества. Хлорид натрия создает оптимальное осмотическое давление. Сложность выделения чистых культур коклюшного микроба из носоглоточной слизи состоит в необходимости подавления сопутствующей микрофлоры в течение длительного инкубационного периода на высокопитательной среде. Для подавления нежелательного роста в среду можно добавить пенициллин. Однако, по данным Lacey (4), часть сопутствующей флоры остается из-за устойчивости к пенициллину. Как показали Broome и соавт. (5), метициллин превосходит пенициллин по ингибирующему действию на назофарингеальную микрофлору, а, по данным Sutcliffe и Abbott (6), цефалексин лучше, чем метициллин. Далее Regan и Lowe (7) показали, что селективной средой может быть основа кровяно-угольного агара половинной концентрации с цефалексином. Основа кровяно-угольного агара используется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины.

Скошенную среду можно также использовать для сохранения лабораторных культур указанных микроорганизмов (с еженедельными пересевами). Угольный агар или Угольный агар с ниацином можно превратить в шоколадный агар для выделения видов Haemophilus.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий серый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,8%-ному (М344) или 1,2%-ному (М646 и М1053) агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среды имеют черную окраску, опалесцирует при затвердевании и содержат нерастворимые в воде черные частицы угля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М344 (6,25% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, раствор М646 (5,45% вес/об) имеет рН 7,5 ± 0,2, а раствор М1053 (5,1% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 37°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)
Рост
Bordetella bronchiseptica (4617)
Обильный
Bordetella parapertussis (15311)
Обильный
Bordetella pertussis (8467)
Обильный

Ссылки:

1. Mishulow L., Sharpe L. S. and Cohen L. L., 1953, J. Pub. Hlth., 43((II) : 1466.
2. Proom H., 1955, J. Gen. Microbiol., 12(I) : 63.
3. Ensminger P. W., Gulberston C. G. and Powell H. M., 1953. J. Infect. Dis., 93(3):266
4. Lacey B.W., 1954, J. Hyg., 59:273.
5. Broome C.V., Fraser D.W. and English J.W., 1979, Internat. Symp. on Pertussis DHEW J., Washington D.C. pp 19-29.
6. Sutcliffe E.M. and Abbott J.D., 1979, B.M.J. II:732-733.
7. Regan and Lowe F., 1977, J. Clin. Microbiol., 6:303.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.