Полужидкая среда для определения индола и орнитиндекарбоксилазы
|
M I O Medium
Полужидкая среда для определения индола и орнитиндекарбоксилазы |
M378
|
Эту среду рекомендуют для идентификации энтеробактерий по подвижности, образованию индола и орнитиндекарбоксилазы.
 |
Рост на среде MIO Medium (M378), слева направо:
|
Состав**:
|
Ингредиенты
|
грамм/литр
|
|
Гидролизат казеина
|
10,00
|
|
Пептический перевар животной ткани
|
10,00
|
|
Дрожжевой экстракт
|
3,00
|
|
L-Орнитина гидрохлорид
|
5,00
|
|
Глюкоза
|
1,00
|
|
Бромкрезоловый пурпурный
|
0,02
|
|
Агар-агар
|
2,00
|
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,5 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 31,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в пробирки по 5 мл. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки в вертикальном положении.
Принцип и оценка результата:
Эту среду предложил две группы авторов (1, 2) для идентификации энтеробактерий по подвижности, образованию индола и орнитиндекарбоксилазы в одной пробирке.
Гидролизат казеина, пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ и витаминов группы В для роста бактерий. Глюкоза является ферментируемым субстратом, из которого образуются кислые продукты. Посев делают уколом в столбик среды.
Признаки подвижности и орнитиндекарбоксилазной активности учитывают перед тестом на индол. Подвижные микроорганизмы дают диффузный рост, неподвижные растут по ходу укола. Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, закисляют среду, изменяя цвет индикатора бромкрезолового пурпурного с лилового на желтый. При наличии соответствующего фермента орнитин декарбоксилируется с образованием путресцина, который защелачивает среду и изменяет ее цвет с желтого на лиловый по всей среде. При отрицательной реакции на орнитиндекарбоксилазу среда выглядит желтой или имеет лиловую полоску в верхней части столбика. Индол может образоваться из триптофана, присутствующего в гидролизате казеина (3, 4). При добавлении реактива Ковача присутствующий в нем альдегид реагирует с образовавшимся индолом, в результате чего образуется комплекс красного цвета.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,2%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет лиловую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (3,1% вес/об) имеет рН 6,5 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35-37°С.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Подвиж
ность |
Индол
|
Орнитин
|
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
+
|
–
|
+
|
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
+
|
+
|
+
|
|
Klebsiella pneumoniae (13883)
|
Обильный
|
–
|
–
|
–
|
|
Proteus mirabilis (25933)*
|
Обильный
|
+
|
–
|
+
|
Примечания:
"+" - положительная реакция;
"–" - отрицательная реакция;
"*" - подвижность у Proteus mirabilis имеет температурозависимое выражение (более выражена при 20°С, нежели, чем при 35°С).
Ссылки:
1. Ederer and Clark, 1970, Appl. Microbiol., 20:849.
2. Oberhofer and Hajkowski, 1970, Am. J. Clin. Pathol., 54:720.
3. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria., Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
4. Ewing, 1986, Edwards and Ewing’s ‘Identification of Enterobacteriaceae’, 4th ed., Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.