OF Basal Medium Среда Хью-Лейфсона для теста ОФ

M395

 

Эта среда используется для дифференциации грамотрицательных микроорганизмов в зависимости от наличия у них ферментативного или окислительного метаболизма углеводов.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина	2,00
Натрия хлорид	5,00
Калия гидрохлорид	0,30
Бромтимоловый синий	0,08
Агар-агар	2,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,8 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 9,4 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить по 100 мл и стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. К первым 100 мл основы асептично добавить 10 мл стерильного 10%-ного раствора глюкозы, ко вторым 100 мл – такое же количество 10%-ного раствора лактозы, к третьим 100 мл – сахарозы. Перемешать и разлить по 5 мл в пары стерильных пробирок (для культивирования в аэробных и анаэробных условиях).

Принцип и оценка результата:

Основа среды готовится по прописи, предложенной Хью и Лейфсоном (1). Авторы показали, что грамотрицательные микроорганизмы дают разные реакции в среде с углеводами на воздухе и под слоем вазелинового масла в бескислородной среде. «Ферментирующие» микроорганизмы продуцируют кислоту в тех и других условиях. «Окисляющие» образуют кислоту только в открытой среде, а под слоем масла растут слабо, не изменяя цвет среды. Другие микроорганизмы не вызывают изменения среды под маслом и дают щелочную реакцию открытой среды (2).

Каждый тестируемый микроорганизм засевают уколом в пробирки с каждым углеводом. В одну из них вносят 2 мл стерильного вазелинового масла, а другую оставляют для контакта посева с воздухом непокрытой. Пробирки инкубируют при 35°С на 48 ч или более. Через 48 ч учитывают результаты, отмечая образование кислоты, кислоты и газа или отсутствие изменений сред.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий зеленовато-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,2%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет зеленую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (0,94% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Среда без глюкозы		Среда с глюкозой
	Аэробно	Анаэробно	Аэробно	Анаэробно
Acinetobacter calcoaceticus (19606)	Щ	Щ	А	Щ
Alcaligenes faecalis	Щ	Щ	Щ	Щ
Enterobacter aerogenes (13048)	Щ	Щ	КГ	КГ
Escherichia coli (25922)	Щ	Щ	КГ	КГ
Pseudomonas aeruginosa (9027)	Щ	Щ	К	Щ
Salmonella enteritidis (13076)	Щ	Щ	КГ	КГ
Shigella flexneri (12022)	Щ	Щ	К	К
Vibrio cholerae (15748)	Щ	Щ	К	К

Примечание:
"Щ" - щелочь, зеленый или неизмененный цвет среды;
"К" - кислота, желтый цвет среды;
"Г" - газ (иногда отмечается).

Ссылки:

1. Hugh R. and Leifson E., 1953, J. Bact., 66:24.
2. MacFaddin J., 1985, Media for the Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.