Caffeic Acid Ferric Citrate Test Agar Агар для идентификации криптококков

М563

 

Среду используют для быстрой идентификации Cryptococcus neoformans.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Дрожжевой экстракт	2,00
Глюкоза	5,00
Аммония сульфат	5,00
Калия гидрофосфат	0,80
Магния сульфат	0,70
Кофеиновая кислота	0,18
Железа цитрат	0,02
Агар-агар	20,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,5 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 33,7 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в соответствующую посуду и стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50-55°С и (при необходимости) асептично добавить левомицетин (до 50 мкг/мл).

Принцип и оценка результата:

Среду используют для быстрой идентификации Cryptococcus neoformans и дифференциации с другими видами криптококков. Эта среда описана Hopfer и Blank (1). Она содержит кофеиновую кислоту, которая служит селективным агентом для Cryptococcus neoformans. Кофеиновая кислота является орто-дифеноловым соединением и под влиянием фермента фенолоксидазы может разлагаться с образованием темно-коричневого меланинового пигмента. Cryptococcus neoformans имеют уникальную способность образовывать меланин или меланин-подобные пигменты из пара- или орто-фенолов (2, 3), что отличает их, например, от грибов Candida albicans (4). Цитрат железа также важен, поскольку Cryptococcus neoformans синтезируют пигмент только в присутствии цитрата железа. Если в среду добавлен левомицетин, на ней подавляется рост бактериальной флоры. Глюкоза служит субстратом для ферментации. Дрожжевой экстракт является источником азотистых питательных веществ и витаминов группы В. Сульфаты и фосфат придают буферные свойства среде.

Рост криптококков на данной среде надо сравнивать с ростом на других средах, где может проявляться естественная пигментация колоний. Без этого возможно получение ложно-положительного результата. В случае обильного роста образование пигмента замедляется.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среды имеет светло-голубую окраску. Прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,37% вес/об) имеет рН 6,5 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 25°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост*	Цвет колоний
Candida albicans (10231)	Хороший	Белый
Cryptococcus neoformans	Хороший	Коричневый
Escherichia coli (25922)	Подавляется	–
Staphylococcus aureus (25923)	Подавляется	–

Примечание:
* - после добавления левомицетина (50 мкг/мл)

Ссылки:

1. Hopfer R.L. and Blank F., 1975, J. Clin. Microbiol., 2(2):115.
2. Chaskes S. and Tyndall R., 1975, J. Clin. Microbiol., 1(6):509.
3. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.
4. Korth H. and Pulverer G., 1971, Appl. Microbiol., 21:541.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.