Motility Nitrate Medium, Buffered Полужидкий агар с нитратом, забуференный

M630 / М630I

 

Эту среду рекомендуют для определения и выделения по их подвижности и способности к восстановлению нитрата.

Состав**:

Ингредиенты	М630 грамм/литр	М630I грамм/литр
Пептический перевар животной ткани	5,00	5,00
Мясной экстракт	3,00	3,00
Галактоза	5,00	5,00
Калия нитрат	5,00	1,00
Натрия гидрофосфат	2,50	2,50
Агар-агар	3,00	3,00
Конечное значение рН (при 25°С)	7,3 ± 0,2	7,1 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 23,5 г порошка М630 или 19,5 г порошка М630I в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Разлить в пробирки для тестирования, заполнив их наполовину. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Быстро остудить под струей воды для застывания агара в вертикальном положении до комнатной температуры.

Принцип и оценка результата:

Эта среда соответствует по прописи рекомендациям FDA (1) и APHA (2). С небольшими изменениями (М630I) она рекомендована комитетом ISO (3).

Пептический перевар животной ткани и мясной экстракт обеспечивают присутствие важнейших нутриентов для роста бактерий. Нитрат калия является субстратом для выявления нитратредуктазы, что требует еще двух реактивов: сульфаниловой кислоты (1,0 г в 125 мл 5-нормальной уксусной кислоты) и N-(-1-нафтил)-этилендиамина дигидрохлорида (0,25 г в 200 мл 5-нормальной уксусной кислоты). Небольшое количество агар-агара позволяет определять в полужидкой среде и подвижность.

Чистые культуры, выращенные на Жидкой тиогликолевой среде (М009) или Триптон-сульфитном агаре с циклосерином (М837), засевают уколом в Полужидкий агар с нитратом забуференный и инкубируют при 35°С в течение 24-48 ч.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок желтого цвета.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,3%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна, если в пробирках формируются столбики геля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М630 (2,35% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, а водный раствор М630I (1,95% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2 .

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Подвижность	Восстановление нитрата
Clostridium perfringens (12924)	–	+
Clostridium absonum (27555)	w	±

Примечания:
"+" - красно-фиолетовый цвет;
"±" - реакция слабая или отсутствует;
"–" - рост по ходу укола;
"w" - слабая подвижность.

Ссылки:

1. Bacteriological Analytical Manual, 1995, Food and Drug Administration, 8th ed., AOAC International, USA.
2. Vanderzant C. and Splittstoesser D. (Eds.), 1992, Compendium of Methods for Microbiological Examination of Foods, 3rd ed., APHA, Washington D.C.
3. International Organization for Standardization (ISO), 1985, Draft ISO/DIS 7937.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.