Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base Основа забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом	M813
Modified Buffered Charcoal Agar Base Основа забуференного угольного агара модифицированная	M892

 

Эта среда после внесения соответствующих добавок используется для выделения и культивирования видов Legionella.

Состав**:

Ингредиенты	M813 грамм/литр	M892 грамм/литр
Протеозопептон	–	10,00
Дрожжевой экстракт	10,00	–
Уголь активированный	2,00	2,00
Буфер ACES	10,00	10,00
Калия a-кетоглютарат	1,00	1,00
Агар-агар	17,00	17,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,9 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 20,0 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С, асептично добавить растворенные в стерильной воде специальные добавки для легионелл (FD041 и FD040). Тщательно перемешать и при постоянном помешивании разлить в стерильные чашки Петри, следя за тем, чтобы частицы угля распределялись равномерно. При необходимости повысить селективность в расплавленную среду можно внести также селективные добавки для легионелл (FD017, FD183R, FD038).

Принцип и оценка результата:

Первоначально Feeley и соавт. (1) разработали агар FD, который затем был модифицирован Edelstein (2) для селективного культивирования и оптимизации роста легионелл, нуждающихся в специальных средах. Легионеллы не растут на кровяном агаре с бараньей кровью и не утилизируют (окислением или ферментацией) углеводы на общепринятых средах. В качестве основного источника энергии они используют аминокислоты, а один вид имеет абсолютную потребность в L-цистеине. Эта аминокислота, как и пирофосфат железа, способствуют росту легионелл. В качестве детоксиканта среда содержит активированный уголь. Дрожжевой экстракт является богатым источником витаминов, азота и углерода. Буфер ACES обеспечивает поддержание оптимальных значений рН. Цистеин, пирофосфат железа и кетоглютарат стимулируют рост легионелл. Для подавления роста сопутствующих микроорганизмов и придания селективных свойств среде в нее можно вносить антибиотики. Обычно для этой цели применяют следующие добавки: Legionella Selective Supplement II (CCVC), содержащую цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид (3) или Legionella Selective Supplement IV (MWY), содержащую глицин, полимиксин В, анизомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный (4).

Следует отметить, что работа с культурами легионелл должна проводиться в защитных масках, перчатках, с использованием ламинарного бокса и другими предосторожностями.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий черный порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет серо-черную окраску, опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М813 или М892 (4,0% вес/об) имеют рН 6,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 3-4 дня при 35°С в атмосфере 90%-ной влажности.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост*	Цвет колоний
Legionella pneumophila (33153)	Обильный	Бело- или голубовато-серые
Legionella dumoffii (33343)	Обильный	Слегка голубовато-серые
Escherichia coli (25922)	Слабый или отсутствует	–
Staphylococcus epidermidis (12228)	Слабый или отсутствует	–

Примечание: * в присутствии селективной добавки с антибиотиками

Ссылки:

1. Feeley J.C., Gibson R.J., Gorman G.W. et al, 1979, J. Clin. Microbiol., 10:437.
2. Edelstein P.H., 1981, J. Clin. Microbiol., 14:298.
3. Bopp C.A., Sumner J.W., Morris G.K. and Wells J.G., 1981, J. Clin. Microbiol., 13:714.
4. Vicker R., Brown and Garrity, 1981, J. Clin. Microbiol., 13:380.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.