Differential Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base
Основа дифференциального забуференного угольного агара с дрожжевым экстрактом
|
M814
|
Эта среда используется для селективного выделения и дифференциации видов Legionella.
Ингредиенты
|
грамм/литр
|
Дрожжевой экстракт
|
10,00
|
Уголь активированный
|
1,50
|
L-цистеина гидрохлорид
|
0,40
|
Железа пирофосфат растворимый
|
0,25
|
Буфер ACES
|
10,00
|
a-Кетоглютарат
|
0,20
|
Бромкрезоловый пурпурный
|
0,01
|
Бромтимоловый синий
|
0,01
|
Агар-агар
|
15,00
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,9 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 37,37 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. При необходимости в стерильную среду можно добавить полимиксин В (50 ЕД/мл) и ванкомицин (1 мг/мл). Разлить готовую среду в чашки Петри.
Первоначально Feeley и соавт. (1) разработали агар FD, который затем был модифицирован Feeley и соавт. (2) для селективного культивирования и дифференциации легионелл. В модифицированной среде крахмал и гидролизат казеина заменены на активированный уголь и дрожжевой экстракт, соответственно, что способствует выделению Legionella pneumophila. Буфер ACES обеспечивает поддержание оптимальных значений рН (3).
Эта среда содержит дрожжевой экстракт, который обеспечивает ее питательными веществами. Пирофосфат железа, L-цистеина гидрохлорид и a-кетоглютарат стимулируют рост легионелл (4). Образующиеся в процессе роста токсические вещества нейтрализуются активированным углем, который изменяет поверхностное натяжение среды.
Бромкрезоловый пурпурный и бромтимоловый синий служат индикаторами рН в среде (5). Полимиксин В подавляет рост большинства грамотрицательных бактерий, а ванкомицин – грамположительных.
Следует отметить, что работа с культурами легионелл должна проводиться в защитных масках, перчатках, с использованием ламинарного бокса и другими предосторожностями. Рабочие поверхности необходимо очищать с применением 5%-ного раствора гипохлорита. Перед очисткой или сбрасыванием все материалы надо подвергать автоклавированию.
Гомогенный сыпучий черный порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Готовая среда имеет серо-черную окраску, опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (3,74% вес/об) имеют рН 6,9 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штаммов через 72-96 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост*
|
Цвет колоний
|
Legionella pneumophila (33153)
|
Обильный
|
Бело- или голубовато-серые
|
Legionella dumoffii (33343)
|
Обильный
|
Голубовато-серые
|
1. Feeley, et al, 1978, J. Clin. Microbiol., 8:320.
2. Feeley, Gibson, Gorman, et al, 1979, J. Clin. Microbiol., 10:437.
3. Pasculle, Feeley, Gibson, et al, 1980, J. Infect. Dis., 141:727.
4. Edelstein, 1981, J. Clin. Microbiol., 14:298.
5. Vickers, Brown and Garrity, 1981, J. Clin. Microbiol., 13:380.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.