PM Indicator Agar
Индикаторный агар для пенициллина
M849

 

Агар рекомендован для быстрого определения остаточных количеств пенициллина в молоке с использованием бактерий Bacillus stearothermophilus, в соответствии с методикой АОАС.

Состав**:

Ингредиенты
грамм/литр
Пептический перевар животной ткани
5,00
Гидролизат казеина
1,70
Папаиновый перевар соевой муки
0,30
Мясной экстракт
3,00
Глюкоза
5,25
Натрия хлорид
0,50
Калия гидрофосфат
0,25
Твин-80
1,00
Бромкрезоловый пурпурный
0,06
Агар-агар
15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,8 ± 0,2
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 3,2 г порошка в 100 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С.

Принцип и оценка результата:

Агар рекомендован для быстрого определения остаточных количеств пенициллина в молоке с использованием бактерий Bacillus stearothermophilus, в соответствии с методикой дисков, рекомендованной АОАС (1). Первоначально эта среда (под другим названием) была предложена для определения пенициллина в молоке с использованием бактерий Bacillus subtilis (2), однако представленная среда дает более быстрые и достоверные результаты (на ней виден не только рост, но образование кислоты бактериями Bacillus stearothermophilus, которые чувствительны к пенициллину и бета-лактамным остаткам). В соответствии с рекомендациям специалистов АОАС, для определения следовых количеств пенициллина в молоке лучше использовать диски с определенным количеством пенициллина.

Агар засевают 1 мл гомогенной суспензии Bacillus stearothermophilus, приготовленной в соответствии с рекомендациями (1). Готовят разведения стандарта пенициллина G (положительный контроль) для получения градиента концентраций от 0,005 до 0,1 ЕД/мл. В качестве отрицательного контроля используют свободное от ингибиторов обезжиренное сухое молоко.

Для скринингового исследования: наложить на поверхность агара диск с исследуемым молоком, стандартный положительный и контрольный отрицательный диски; перевернуть чашку и инкубировать до появления зоны задержки роста диаметром 17-20 мм вокруг диска, служащего положительным контролем.

Интерпретация результатов скринингового исследования

Диск с исследуемым материалом
Диск – положительный контроль
Диск -
отрицательный контроль
Интерпретация
Нет зоны
Зона задержки роста диамером 17-20 мм
Нет зоны
Тест отрицательный: в исследуемом материале отсутствуют ингибиторы роста
Зона задержки роста диамером £ 14 мм
Зона задержки роста диамером 17-20 мм
Нет зоны
Тест отрицательный: в исследуемом материале отсутствуют ингибиторы роста
Зона задержки роста диамером > 14 мм
Зона задержки роста диамером 17-20 мм
Нет зоны
Тест положительный: в исследуемом материале присутствует ингибитор роста. Для подтверждения его принадлежности к бета-лактамным остаткам необходимо дополнительное исследование.
Любой результат
Любой результат
Любая зона
Ошибка в работе тест-системы
Любой результат
Нет зоны
Любой результат
Ошибка в работе тест-системы

 

Для подтверждающего исследования: инактивировать образец молока прогреванием в течение 2 минут при 82°С. Быстро остудить до комнатной температуры. Подготовить чашки и инкубировать, как при скрининговом исследовании.

Интерпретация результатов подтверждающего исследования

 

Диск с инактиви-рованным образцом
Диск – положительный контроль
Диск с инактиви-рованным образцом молока и пенициллиназой
Интерпретация
Зона задержки роста диамером > 14 мм
Зона задержки роста диамером 17-20 мм
Нет зоны
Тест положительный: в исследуемом материале присутствуют
бета-лактамные остатки.
Зона задержки роста диамером > 14 мм
Зона задержки роста диамером 17-20 мм
Зона задержки роста такого же диаметра, как зона образца
Тест положительный: в исследуемом материале присутствует ингибитор(ы) роста, не относимые к бета-лактамным остаткам.
Зона задержки роста диамером > 14 мм
Зона задержки роста диамером 17-20 мм
Зона задержки роста значительно меньшего диамера, чем 14 мм
Тест положительный: в исследуемом материале присутствуют бета-лактамные остатки и другие ингибиторы.

 

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий бежевый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет лиловую окраску, слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,2% вес/об) имеет рН 7,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Температура инкубирования
Время
55 ± 2°С
3-4 ч
64 ± 2°С
2-3 ч

Ссылки:

1. Official Methods of Analysis of AOAC, 1970, 11th ed., AOAC International, 16th ed., Virginia, U.S.A.
2. Publ. of the 18th Annual Meeting of Natl. Mastitis Council, Inc.
3. Reid and Brewer, 1946, J. Bact., 52 : 251.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +8°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.