Listeria Enrichment Medium (UVM Medium)
Среда обогащения для листерий (Среда UVM) |
М890A
|
Эту среду используют для селективного культивирования и выделения Listeria monocytogenes из клинического материала.
Ингредиенты
|
грамм/литр
|
Гидролизат казеина
|
5,00
|
Протеозопептон
|
5,00
|
Мясной экстракт
|
5,00
|
Дрожжевой экстракт
|
5,00
|
Натрия хлорид
|
20,00
|
Калия дигидрофосфат
|
1,35
|
Натрия гидрофосфат
|
12,00
|
Эскулин
|
1,00
|
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 54,37 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С и асептично добавить стерилизованный фильтрованием раствор акрифлавина гидрохлорида (до конечной концентрации 12 мкг/мл или 25 мкг/мл).
Основная пропись среды предложена сотрудниками Университета Вермонта (1), которая затем была изменена (2), а именно уменьшена концентрация налидиксовой кислоты и увеличена концентрация акрифлавина для вторичного селективного обогащения. Среду используют для двухступенчатого селективного обогащения листерий, что позволяет увеличить высеваемость Listeria monocytogenes из мясных продуктов в течение 3-4 дней. Эту среду рекомендуют в качестве среды первичного обогащения для выделения листерий, поврежденных при термической обработке (3).
Гидролизат казеина, протеозопептон, дрожжевой и мясной экстракты являются источником необходимых питательных веществ для роста листерий. Эскулин придает среде дифференцирующие свойства. Налидиксовая кислота и акрифлавин подавляют рост, соответственно, грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, что, наряду с повышенной концентрацией фосфата, придает среде селективные свойства по отношению к листериям.
Для обогащения к 25,0 г или 25,0 мл материала добавляют 225 мл среды, содержащей 12 мкг/мл акрифлавина и инкубируют при 30°С в течение 4 часов, после чего высевают 0,2 мл культуры на чашки с Селективным агаром для листерий. Через 24 ч инкубирования 0,1 мл культуры вносят в 10,0 мл той же среды, содержащей 25 мкг/мл акрифлавина гидрохлорида, и через 24 ч снова делают высев на чашки с Селективным агаром для листерий. Бульонные культуры листерий представляют большую опасность, по сравнению с колониями на агаре, поэтому при работе с ними надо соблюдать особую осторожность.
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Готовая среда имеет янтарную окраску, слегка опалесцирует с голубоватым оттенком.
При 25°С водный раствор (5,44% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Listeria monocytogenes (19118)
|
Обильный или хороший
|
Escherichia coli (25922)
|
Отсутствует или слабый
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Отсутствует или слабый
|
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.