|
|
Всего посетителей: 3850939
|
|
|
Среда для тестов с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра
Среду рекомендуют для тестов с метиловым красным и на ацетоин, которые позволяют проводить дифференциацию энтеробактерий.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам Приготовление:Размешать 17,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Разлить в пробирки по 10 мл. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Принцип и оценка результата:Clark и Lubs (1) нашли, что добавление индикатора метилового красного к культурам Escherichiacoliприводит к появлению красного окрашивания ввиду сильного закисления среды в результате ферментации глюкозы. Voges-Proskauer (2) отметил развитие красного окрашивания после добавления гидроксида калия к определенным средам после культивирования на них микроорганизмов. Исследователи разработали данную среду для проведения обоих тестов (в разных пробирках). Появление красного окрашивания при добавлении гидроксида калия связано с образованием некоторыми культурами нейтрального продукта – ацетоина (ацетилметилкарбинола) из глюкозы (3). Ацетоин в щелочной среде на воздухе окисляется с образованием диацетила, который реагирует с креатином, что сопровождается появлением красного окрашивания. Эта среда рекомендована международным комитетом (4) для определения микроорганизмов группы «coli-aerogenes». Тест с метиловым красным проводят через 5 дней инкубирования при 30°С (5), тест Фогеса-Проскауэра – через 24-48 ч инкубирования при той же температуре (6). Предложены разные варианты тестов (5, 7, 8, 9). Тест Werkman (7): добавляют 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа к 50 мл культуры и 5 мл 10%-ного гидроксида натрия. Встряхивают пробирку для тщательного перемешивания содержимого с воздухом. При положительной реакции в течение нескольких минут развивается стойкий медный цвет. Тест O’Meara (8): добавляют 25 мг порошка креатина к 5 мл культуры, а затем – 5 мл концентрированного (40%) гидроксида натрия. Тщательного встряхивают пробирку для перемешивания содержимого. При положительной реакции в течение нескольких минут развивается красный цвет. Levine, Epstein и Voughn (9) модифицировали метод O’Meara, предложив растворять креатин в концентрированном растворе гидроксида калия (R031 - O’Meara Reagent). Voughn, Mitchell и Levin (5) рекомендовали использовать метод Barritt (10): к 5 мл культуры добавляют 1 мл 40%-ного раствора гидроксида калия (R030 – Barrit Reagent B) и 3 мл 5%-ного раствора а-нафтола в абсолютном этаноле (R029 – Barrit Reagent A). При положительной реакции в течение 2-5 минут развивается эозиново-красный цвет. Контроль качества:Внешний вид порошка:Гомогенный сыпучий кремовый порошок. Цвет и прозрачность готовой среды:Готовая среда имеет светло-желтый цвет, прозрачна, без какого-либо преципитата. Кислотность среды:При 25°С водный раствор (1,7% вес/об) имеет рН 6,9 ± 0,2. Культуральные свойства:Ростовые характеристики референс-штаммов через 48 ч при 30°С.
Ссылки:1. Clark and Lubs, 1915, J. Inf. Dis., 17 : 160. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
|