|
|
Всего посетителей: 3846585
|
|
|
Среды МакКонки
Среды МакКонки в качестве дифференциальных рекомендуют для селективного выделения энтеробактерий и близких к ним грамотрицательных палочек. В группу входят следующие среды.
Назначение сред МакКонкиМ081, М081А и М081В: Готовят в соответствии с рекомендациями американской Фармакопеи (1). Они содержат кристаллвиолет и, по сравнению со средой М008, обладают высокой селективностью, подавляя рост многих грамположительных бактерий, включая стафилококков. М008, М008А и М008В: Эти модификации агара готовят без добавления кристаллвиолета, поэтому они имеют меньшую селективность, по сравнению с оригинальным агаром МакКонки (М081). М082: Этот агар готовят в соответствии с прописью для целей клинической микробиологии (2). На этой дифференциальной среде подавляется роение большинства штаммов протеев, что значительно облегчает выделение кишечных бактерий. Она особенно полезна для посевов мочи, так как в ней, наряду с оппортунистическими грамположительными бактериями, может содержаться большое количество протеев. Энтерококки образуют на ней карликовые красноватые колонии. М082А: Этот агар является модификацией агара М082, он содержит соли желчных кислот и уменьшенное количество агар-агара. М051: Этот агар используют для определения и выделения клебсиелл из воды и другого материала мембранным методом. М298: Данный агар содержит вместо лактозы сорбит. Его рекомендуют для определения энтерогеморрагических Escherichia coli (3). М061: Эта среда имеет почти такой же состав, как агар М008, но вместо нейтрального красного введен индикатор бромтимоловый синий. М007: Считают стандартным агаром для первичного выделения и предварительной идентификации колиформных бактерий при исследовании крови и воды. В качестве индикатора использован нейтральный красный. М539: Этот бульон рекомендуют для первичного выделения колиформных бактерий при исследовании больших объемов воды. М083 и М083I: Эти два бульона имеют то же назначение, что среда М007, но в качестве индикатора рН содержат бромкрезоловый пурпурный вместо нейтрального красного (4, 5). Их рекомендуют для предварительной идентификации колиформных бактерий при исследовании воды, молока, пищевых продуктов и другого материала. М796: Эта жидкая среда имеет почти такой же состав, как среда М539, но вместо нейтрального красного введен индикатор бромкрезоловый пурпурный. М1024: Данную среду используют для изучения ферментации углеводов у колиформных бактерий. Углеводы добавляют в среду по одному или в сочетаниях (6). М1125: Этот бульон рекомендуют для определения и подсчета ферментирующих лактозу кишечных бактерий из молока или воды мембранным методом (5).
Состав сред МакКонки:
|
Ингредиенты (грамм/литр)
|
M008
|
M008A
|
M008B
|
M081
|
M081A
|
M081B
|
M082
|
M082A
|
M298
|
Пептический перевар животной ткани
|
17
|
20
|
17
|
1,5
|
20
|
1,5
|
20
|
20
|
17
|
Протеозопептон
|
3
|
–
|
3
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
3
|
Гидролизат казеина
|
–
|
–
|
–
|
1,5
|
–
|
1,5
|
–
|
–
|
–
|
Панкреатический перевар желатина
|
–
|
–
|
–
|
17
|
–
|
17
|
–
|
–
|
–
|
Лактоза
|
10
|
10
|
10
|
10
|
10
|
10
|
10
|
10
|
–
|
Сорбит
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
10
|
Соли желчных кислот
|
1,5
|
5
|
1,5
|
1,5
|
1,5
|
1,5
|
–
|
5
|
1,5
|
Натрия таурохолат
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
5
|
–
|
–
|
Натрия хлорид
|
5
|
5
|
5
|
5
|
5
|
5
|
–
|
–
|
5
|
Кристаллический фиолетовый
|
–
|
–
|
–
|
0,001
|
0,001
|
0,001
|
–
|
–
|
0,001
|
Нейтральный красный
|
0,003
|
0,075
|
0,003
|
0,003
|
0,005
|
0,003
|
0,004
|
0,075
|
0,003
|
Агар-агар
|
15
|
12
|
12
|
15
|
15
|
13,5
|
20
|
12
|
13,5
|
РН (при 25°С) ± 0,2
|
7,1
|
7,4
|
7,1
|
7,1
|
7,2
|
7,1
|
7,4
|
7,4
|
7,1
|
Количество г/л
|
51,53
|
52,0
|
48,5
|
51,5
|
51,55
|
50,0
|
55,0
|
47,0
|
50,0
|
Ингредиенты (грамм/литр)
|
М051
|
M061
|
M1024
|
M1025
|
M007
|
M539
|
M083
|
M083I
|
M796
|
Пептический перевар животной ткани
|
17
|
17
|
17
|
10
|
20
|
40
|
20
|
20
|
40
|
Протеозопептон
|
3
|
3
|
3
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
Лактоза
|
–
|
10
|
–
|
30
|
10
|
20
|
10
|
10
|
20
|
Инозит
|
10
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
Соли желчных кислот
|
1,5
|
1,5
|
1,5
|
4
|
5
|
10
|
–
|
5
|
10
|
Натрия таурохолат
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
5
|
–
|
–
|
Натрия хлорид
|
5
|
5
|
5
|
5
|
5
|
10
|
5
|
5
|
10
|
Кристаллический фиолетовый
|
0,001
|
–
|
0,001
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
Нейтральный красный
|
0,03
|
–
|
0,03
|
–
|
0,075
|
0,15
|
–
|
–
|
–
|
Бромкрезоловый пурпурный
|
–
|
–
|
–
|
0,12
|
–
|
–
|
0,01
|
0,01
|
0,02
|
Бромтимоловый синий
|
–
|
0,03
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
Агар-агар
|
13,5
|
15
|
13,5
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
–
|
РН (при 25°С) ± 0,2
|
7,1
|
7,1
|
7,1
|
7,4
|
7,4
|
7,4
|
7,4
|
7,4
|
7,4
|
Количество г/л
|
50,0
|
51,53
|
40,0
|
49,12
|
40,0
|
80,15
|
40,0
|
40,0
|
80,0
|
А) Для приготовления плотных сред МакКонки: Размешать соответствующее количество порошка (указано на этикетке) в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ.
Остудить до 45-50°С и разлить в стерильные чашки Петри. Перед посевом поверхность агара должна быть подсушена. Для модифицированного агара МакКонки (М051) автоклавирование не рекомендуется. После кипячения среду остужают до 50°С, добавляют 50 мг карбенициллина на 1000 мл среды, тщательно перемешивают и разлвают в стерильные чашки Петри.
Б) Для приготовления жидких сред МакКонки: Размешать соответствующее количество порошка (указано на этикетке) в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть для полного растворения частиц. Разлить в пробирки с поплавками. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Перед посевом пробирки остудить.
Засеянные среды инкубировать в аэробных условиях при 35-37°С. Через 18-24 ч на агаре отмечают появление роста колоний, на бульоне – рост, образование кислоты и газа.
Агар МакКонки был самой первой селективной и дифференциальной средой для культивирования кишечных бактерий из различного клинического материала (7, 8). Агар и бульон МакКонки рекомендованы, соответственно, для санитарно-микробиологического обследования персонала (9) и воды путем прямого посева для обнаружения и подсчета колиформных бактерий (10). Эти среды в качестве стандартных рекомендуют применять при исследовании молока и молочных продуктов (11), а также лекарственных средств (1). Оригинальная среда в своем составе имеет протеин, желчные соли, натрия хлорид и два красителя. Селективность среды обусловлена действием кристаллического фиолетового и желчных солей, которые подавляют рост большинства видов грамположительных бактерий. Грамотрицательные бактерии обычно хорошо растут на среде, их можно дифференцировать по ферментации лактозы. Лактозоположительные штаммы растут с образованием розовых или красных колоний, которые могут быть окружены зоной преципитации желчных солей. Красный цвет появляется в результате закисления среды продуктами разложения лактозы (при падении рН ниже 6,8) и адсорбции нейтрального красного. Штаммы, не ферментирующие лактозу (шигеллы, сальмонеллы), обычно образуют прозрачные бесцветные колонии и не изменяют среду. Штаммы Yersinia enterocolitica после инкубирования при комнатной температуре могут образовывать на среде мелкие лактозоотрицательные колонии. Агар МакКонки с сорбитом основан на прописи Rappaport и Henig (3), которые предложили заменить в нем лактозу на сорбит. Он рекомендуется для выделения патогенных Escherichia coli 0157:Н7, которые не ферментируют ни лактозу, ни сорбит и поэтому образуют на данной среде бесцветные колонии. Известно, что эти микроорганизмы вызывают у человека геморрагический колит (12). Вместе с тем, одной среды МакКонки с сорбитом недостаточно для определения штаммов Escherichia coli 0157:Н7, так как некоторые нетоксигенные штаммы тоже не ферментируют сорбит (13). Модифицированный агар МакКонки (М051) готовят по стандартной прописи (10). Клебсиеллы относят к колиформным бактериям и они в большом количестве могут содержать в сточных водах, образующихся при производстве бумаги, тканей и др. Среди колиформных бактерий, выделяемых от человека и теплокровных животных, клебсиеллы могут составлять 30-40% штаммов. Условно-патогенные клебсиеллы являются причиной пневмонии в 4% случаев, инфекций мочевого тракта – в 18% случаев. В данной среде вместо лактозы используется инозит и добавляется карбенициллин, что делает ее селективной для клебсиелл. Использование такой среды сокращает, но не исключает дальнейшую биохимическую идентификацию клебсиелл.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю .
Среда имеет оранжево-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,15% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю .
Среда имеет светло-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,2% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю .
Среда имеет светло-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (4,85% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю .
Среда имеет красный цвет с лиловым оттенком, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,15% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю .
Среда имеет красный цвет с лиловым оттенком, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,15% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю .
Среда имеет красный цвет с лиловым оттенком, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,0% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному агаровому гелю .
Среда имеет оранжево-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,5% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю .
Среда имеет оранжево-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (4,7% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю .
Среда имеет лилово-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,0% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю .
Среда имеет лилово-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,0% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю .
Среда имеет зеленую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (5,15% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий розовато-бежевый порошок.
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю .
Среда имеет лилово-красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
При 25°С водный раствор (4,0% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.
Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (4,91% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Среда имеет красную окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (4,0% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Рост энтеробактерий на среде МакКонки (M007), слева направо:
|
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Среда имеет красную окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (8,02% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (4,0% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (4,0% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
При 25°С водный раствор (8,0% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
Розовые
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Розовые или красные
|
Proteus vulgaris (13315)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella enteritidis (13076)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella typhi (6539)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella paratyphi A
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella paratyphi B
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Shigella flexneri (12022)
|
Средний или хороший
|
Бесцветные
|
Enterococcus faecalis (29212)
|
Средний или хороший
|
Бледно-розовые или красные
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Подавляется
|
–
|
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
Розовые или красные
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Розовые или красные с преципитатом желчных солей
|
Proteus vulgaris (13315)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella enteritidis (13076)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella typhi (6539)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella paratyphi A
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella paratyphi B
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Shigella flexneri (12022)
|
Средний или хороший
|
Бесцветные
|
Enterococcus faecalis (29212)
|
Средний или хороший
|
Бесцветные или розовые
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Подавляется
|
–
|
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
Розовые или красные
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Розовые или красные с преципитатом желчных солей
|
Proteus vulgaris (13315)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella enteritidis (13076)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella typhi (6539)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella paratyphi A
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Salmonella paratyphi B
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Shigella flexneri (12022)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Enterococcus faecalis (29212)
|
Средний или хороший
|
Бледно-розовые или красные
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Средний или хороший
|
Бледно-розовые или красные
|
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
Klebsiella pneumoniae (13883)
|
Обильный
|
Розовые
|
Escherichia coli (25922)
|
Подавляется
|
–
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Подавляется
|
–
|
Salmonella typhi (6539)
|
Подавляется
|
–
|
Serratia marcescens (8100)
|
Подавляется
|
–
|
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
Желтые
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Желтые
|
Proteus vulgaris (13315)
|
Обильный
|
Бесцветные или светло-голубые
|
Salmonella typhi (6539)
|
Обильный
|
Бесцветные или светло-голубые
|
Shigella flexneri (12022)
|
Обильный
|
Бесцветные или светло-голубые
|
Enterococcus faecalis (29212)
|
Подавляется
|
–
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Подавляется
|
–
|
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний
|
Escherichia coli (энтерогеморрагические)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Бледно-розовые или красные
|
Salmonella typhi (6539)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Shigella flexneri (12022)
|
Обильный
|
Бесцветные
|
Рост на среде МакКонки (MacConkey Broth, Purple, Double Strength, (M796), слева направо: Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Кислота
|
Газ
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
+
|
+
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
+
|
+
|
Salmonella choleraesuis (12011)
|
Средний или хороший
|
–
|
–
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Подавляется
|
–
|
–
|
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет колоний*
|
Enterobacter aerogenes (13048)
|
Обильный
|
Желтые
|
Escherichia coli (25922)
|
Обильный
|
Желтые
|
Salmonella typhimurium (14028)
|
Средний или хороший
|
Бесцветные или розоватые
|
Staphylococcus aureus (25923)
|
Подавляется
|
–
|
Примечания: * на мембранном фильтре
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.