Среды МакКонки

MacConkey Media
Среды МакКонки

Среды МакКонки в качестве дифференциальных рекомендуют для селективного выделения энтеробактерий и близких к ним грамотрицательных палочек. В группу входят следующие среды.

1	(М008)	MacConkey Agar without CV with 0,15% Bile Salts Агар МакКонки без кристаллвиолета с 0,15% желчных солей
2	(М008А)	MacConkey Agar without CV with 0,5% Bile Salts Агар МакКонки без кристаллвиолета с 0,5% желчных солей
3	(М008В)	MacConkey Agar without CV with 1,2% Agar Агар МакКонки без кристаллвиолета с 1,2% агар-агара
4	(М081)	MacConkey Agar with CV, NaCl and 0,15% Bile Salts Агар МакКонки c кристаллвиолетом и 0,15% желчных солей
5	(М081А)	MacConkey Agar with CV, NaCl and 0,15% Bile Salts Агар МакКонки c кристаллвиолетом и 0,15% желчных солей
6	(М081В)	MacConkey Agar with 1,35% Agar, CV, NaCl and 0,15% Bile Salts Среда МакКонки c 1,3% агар-агара, кристаллвиолетом и 0,15% желчных солей
7	(М082)	MacConkey Agar without CV, NaCl with 0,5% Sodium Taurocholate Агар МакКонки без кристаллвиолета и хлорида натрия, с 0,5% таурохолата натрия
8	(М082А)	MacConkey Agar without CV, NaCl with 0,5% Bile Salts Агар МакКонки без кристаллвиолета и хлорида натрия, с 0,5% желчных солей
9	(М051)	MacConkey Agar, Modified Агар МакКонки модифицированный
10	(М061)	MacConkey Agar with Brom Thymol Blue Агар МакКонки с бромтимоловым синим
11	(М1024)	MacConkey Agar Base Основа агара МакКонки
12	(М298)	MacConkey Sorbitol Agar Агар МакКонки с сорбитом
13	(М007)	MacConkey Broth Бульон МакКонки
14	(М539)	MacConkey Broth (Double Strength) Бульон МакКонки (двойной концентрации)
15	(М796)	MacConkey Broth Purple (Double Strength) Бульон МакКонки с бромкрезоловым пурпурным (двойной концентрации)
16	(М083)	MacConkey Broth Purple МакКонки пурпурный бульон
17	(М083I)	MacConkey Broth (Purple) w/BCP МакКонки бульон (пурпурный) с бромкрезоловым пурпурным
18	(М1125)	M-MacConkey Broth M-Бульон МакКонки

Назначение сред МакКонки

М081, М081А и М081В: Готовят в соответствии с рекомендациями американской Фармакопеи (1). Они содержат кристаллвиолет и, по сравнению со средой М008, обладают высокой селективностью, подавляя рост многих грамположительных бактерий, включая стафилококков.

М008, М008А и М008В: Эти модификации агара готовят без добавления кристаллвиолета, поэтому они имеют меньшую селективность, по сравнению с оригинальным агаром МакКонки (М081).

М082: Этот агар готовят в соответствии с прописью для целей клинической микробиологии (2). На этой дифференциальной среде подавляется роение большинства штаммов протеев, что значительно облегчает выделение кишечных бактерий. Она особенно полезна для посевов мочи, так как в ней, наряду с оппортунистическими грамположительными бактериями, может содержаться большое количество протеев. Энтерококки образуют на ней карликовые красноватые колонии.

М082А: Этот агар является модификацией агара М082, он содержит соли желчных кислот и уменьшенное количество агар-агара.

М051: Этот агар используют для определения и выделения клебсиелл из воды и другого материала мембранным методом.

М298: Данный агар содержит вместо лактозы сорбит. Его рекомендуют для определения энтерогеморрагических Escherichia coli (3).

М061: Эта среда имеет почти такой же состав, как агар М008, но вместо нейтрального красного введен индикатор бромтимоловый синий.

М007: Считают стандартным агаром для первичного выделения и предварительной идентификации колиформных бактерий при исследовании крови и воды. В качестве индикатора использован нейтральный красный.

М539: Этот бульон рекомендуют для первичного выделения колиформных бактерий при исследовании больших объемов воды.

М083 и М083I: Эти два бульона имеют то же назначение, что среда М007, но в качестве индикатора рН содержат бромкрезоловый пурпурный вместо нейтрального красного (4, 5). Их рекомендуют для предварительной идентификации колиформных бактерий при исследовании воды, молока, пищевых продуктов и другого материала.

М796: Эта жидкая среда имеет почти такой же состав, как среда М539, но вместо нейтрального красного введен индикатор бромкрезоловый пурпурный.

М1024: Данную среду используют для изучения ферментации углеводов у колиформных бактерий. Углеводы добавляют в среду по одному или в сочетаниях (6).

М1125: Этот бульон рекомендуют для определения и подсчета ферментирующих лактозу кишечных бактерий из молока или воды мембранным методом (5).

Рост на среде МакКонки (M081) колоний Escherichia coli (красные),
Salmonella серовара Typhi (бесцветные),
Pseudomonas aeruginosa (бесцветные)

Рост на среде МакКонки (M082) колоний
Escherichia coli (крупные красные),
Salmonella серовара Typhi (бесцветные),
Staphylococcus aureus (мелкие красные)
Enterococcus faecalis (точечные)

Рост на среде МакКонки (M051) колоний Klebsiella pneumoniae (вид на черном фоне)

Состав сред МакКонки:

Ингредиенты (грамм/литр)	M008	M008A	M008B	M081	M081A	M081B	M082	M082A	M298
Пептический перевар животной ткани	17	20	17	1,5	20	1,5	20	20	17
Протеозопептон	3	–	3	–	–	–	–	–	3
Гидролизат казеина	–	–	–	1,5	–	1,5	–	–	–
Панкреатический перевар желатина	–	–	–	17	–	17	–	–	–
Лактоза	10	10	10	10	10	10	10	10	–
Сорбит	–	–	–	–	–	–	–	–	10
Соли желчных кислот	1,5	5	1,5	1,5	1,5	1,5	–	5	1,5
Натрия таурохолат	–	–	–	–	–	–	5	–	–
Натрия хлорид	5	5	5	5	5	5	–	–	5
Кристаллический фиолетовый	–	–	–	0,001	0,001	0,001	–	–	0,001
Нейтральный красный	0,003	0,075	0,003	0,003	0,005	0,003	0,004	0,075	0,003
Агар-агар	15	12	12	15	15	13,5	20	12	13,5
РН (при 25°С) ± 0,2	7,1	7,4	7,1	7,1	7,2	7,1	7,4	7,4	7,1
Количество г/л	51,53	52,0	48,5	51,5	51,55	50,0	55,0	47,0	50,0

Ингредиенты (грамм/литр)	М051	M061	M1024	M1025	M007	M539	M083	M083I	M796
Пептический перевар животной ткани	17	17	17	10	20	40	20	20	40
Протеозопептон	3	3	3	–	–	–	–	–	–
Лактоза	–	10	–	30	10	20	10	10	20
Инозит	10	–	–	–	–	–	–	–	–
Соли желчных кислот	1,5	1,5	1,5	4	5	10	–	5	10
Натрия таурохолат	–	–	–	–	–	–	5	–	–
Натрия хлорид	5	5	5	5	5	10	5	5	10
Кристаллический фиолетовый	0,001	–	0,001	–	–	–	–	–	–
Нейтральный красный	0,03	–	0,03	–	0,075	0,15	–	–	–
Бромкрезоловый пурпурный	–	–	–	0,12	–	–	0,01	0,01	0,02
Бромтимоловый синий	–	0,03	–	–	–	–	–	–	–
Агар-агар	13,5	15	13,5	–	–	–	–	–	–
РН (при 25°С) ± 0,2	7,1	7,1	7,1	7,4	7,4	7,4	7,4	7,4	7,4
Количество г/л	50,0	51,53	40,0	49,12	40,0	80,15	40,0	40,0	80,0

Приготовление:

А) Для приготовления плотных сред МакКонки: Размешать соответствующее количество порошка (указано на этикетке) в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ.

Остудить до 45-50°С и разлить в стерильные чашки Петри. Перед посевом поверхность агара должна быть подсушена. Для модифицированного агара МакКонки (М051) автоклавирование не рекомендуется. После кипячения среду остужают до 50°С, добавляют 50 мг карбенициллина на 1000 мл среды, тщательно перемешивают и разлвают в стерильные чашки Петри.

Б) Для приготовления жидких сред МакКонки: Размешать соответствующее количество порошка (указано на этикетке) в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть для полного растворения частиц. Разлить в пробирки с поплавками. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Перед посевом пробирки остудить.

Засеянные среды инкубировать в аэробных условиях при 35-37°С. Через 18-24 ч на агаре отмечают появление роста колоний, на бульоне – рост, образование кислоты и газа.

Принцип и оценка результата:

Агар МакКонки был самой первой селективной и дифференциальной средой для культивирования кишечных бактерий из различного клинического материала (7, 8). Агар и бульон МакКонки рекомендованы, соответственно, для санитарно-микробиологического обследования персонала (9) и воды путем прямого посева для обнаружения и подсчета колиформных бактерий (10). Эти среды в качестве стандартных рекомендуют применять при исследовании молока и молочных продуктов (11), а также лекарственных средств (1). Оригинальная среда в своем составе имеет протеин, желчные соли, натрия хлорид и два красителя. Селективность среды обусловлена действием кристаллического фиолетового и желчных солей, которые подавляют рост большинства видов грамположительных бактерий. Грамотрицательные бактерии обычно хорошо растут на среде, их можно дифференцировать по ферментации лактозы. Лактозоположительные штаммы растут с образованием розовых или красных колоний, которые могут быть окружены зоной преципитации желчных солей. Красный цвет появляется в результате закисления среды продуктами разложения лактозы (при падении рН ниже 6,8) и адсорбции нейтрального красного. Штаммы, не ферментирующие лактозу (шигеллы, сальмонеллы), обычно образуют прозрачные бесцветные колонии и не изменяют среду. Штаммы Yersinia enterocolitica после инкубирования при комнатной температуре могут образовывать на среде мелкие лактозоотрицательные колонии. Агар МакКонки с сорбитом основан на прописи Rappaport и Henig (3), которые предложили заменить в нем лактозу на сорбит. Он рекомендуется для выделения патогенных Escherichia coli 0157:Н7, которые не ферментируют ни лактозу, ни сорбит и поэтому образуют на данной среде бесцветные колонии. Известно, что эти микроорганизмы вызывают у человека геморрагический колит (12). Вместе с тем, одной среды МакКонки с сорбитом недостаточно для определения штаммов Escherichia coli 0157:Н7, так как некоторые нетоксигенные штаммы тоже не ферментируют сорбит (13). Модифицированный агар МакКонки (М051) готовят по стандартной прописи (10). Клебсиеллы относят к колиформным бактериям и они в большом количестве могут содержать в сточных водах, образующихся при производстве бумаги, тканей и др. Среди колиформных бактерий, выделяемых от человека и теплокровных животных, клебсиеллы могут составлять 30-40% штаммов. Условно-патогенные клебсиеллы являются причиной пневмонии в 4% случаев, инфекций мочевого тракта – в 18% случаев. В данной среде вместо лактозы используется инозит и добавляется карбенициллин, что делает ее селективной для клебсиелл. Использование такой среды сокращает, но не исключает дальнейшую биохимическую идентификацию клебсиелл.

При 25°С водный раствор (4,91% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Бульон МакКонки (М007)

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (4,0% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Бульон МакКонки с бромкрезоловым пурпурным (двойной концентрации) (М796)

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (8,0% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Агар МакКонки М008 и М008В

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет колоний
Enterobacter aerogenes (13048)	Обильный	Розовые
Escherichia coli (25922)	Обильный	Розовые или красные
Proteus vulgaris (13315)	Обильный	Бесцветные
Salmonella enteritidis (13076)	Обильный	Бесцветные
Salmonella typhi (6539)	Обильный	Бесцветные
Salmonella paratyphi A	Обильный	Бесцветные
Salmonella paratyphi B	Обильный	Бесцветные
Shigella flexneri (12022)	Средний или хороший	Бесцветные
Enterococcus faecalis (29212)	Средний или хороший	Бледно-розовые или красные
Staphylococcus aureus (25923)	Подавляется	–