Antibiotic Assay Media

Среды используются в микробиологических исследованиях по определению различных антибиотиков в продуктах фармации, пищевых продуктах и др. Ниже представлен список имеющихся сред.

Antibiotic Assay Medium №36 (M290) Рост на среде без антибиотиков

 

1	(М003)	Antibiotic Assay Medium No. 1 (Seed Agar) Среда для испытания антибиотиков N 1 (Посевной, «верхний», агар)	12	(М254)	Antibiotic Assay Medium No. 13 (Nystatin Assay Broth) Среда для испытания антибиотиков N 13 (Нистатиновый бульон)
2	(М005)	Antibiotic Assay Medium No. 2 (BaseAgar) Среда для испытания антибиотиков N 2 (Основной, «нижний», агар)	13	(М101)	Antibiotic Assay Medium No. 19 Среда для испытания антибиотиков N 19
3	(М042)	Antibiotic Assay Medium No. 3 (Assay Agar) Среда для испытания антибиотиков N 3 (Исследовательский агар)	14	(М1141)	Antibiotic Assay Medium No. 32 Среда для испытания антибиотиков N 32
4	(М140)	Antibiotic Assay Medium No. 4 (Yeast Agar) Среда для испытания антибиотиков N 4 (Дрожжевой агар)	15	(М797)	Antibiotic Assay Medium No. 34 Среда для испытания антибиотиков N 34
5	(М006)	Antibiotic Assay Medium No. 5 (Streptomicin Assay Agar) Среда для испытания антибиотиков N 5 (Стрептомициновый агар)	16	(М798)	Antibiotic Assay Medium No. 35 Среда для испытания антибиотиков N 35
6	(М223)	Antibiotic Assay Medium No. 6 Среда для испытания антибиотиков N 6	17	(М290)	Antibiotic Assay Medium No. 36 Среда для испытания антибиотиков N 36
7	(М041)	Antibiotic Assay Medium No. 8 Среда для испытания антибиотиков N 8	18	(М011)	Antibiotic Assay Medium No. 37 Среда для испытания антибиотиков N 37
8	(М147)	Antibiotic Assay Medium No. 9 (Polymyxin Base Agar) Среда для испытания антибиотиков N 9 (Полимиксиновый агар, «нижний»)	19	(М799)	Antibiotic Assay Medium No. 38 Среда для испытания антибиотиков N 38
9	(М225)	Antibiotic Assay Medium No. 10 (Polymyxin Seed Agar) Среда для испытания антибиотиков N 10 (Полимиксиновый агар, «верхний»)	20	(М1142)	Antibiotic Assay Medium No. 39 Среда для испытания антибиотиков N 39
10	(М004)	Antibiotic Assay Medium No. 11 (Neomycin, Erytromycin Assay Agar) (Агар для определения неомицина или эритромицина )	21	(М1143)	Antibiotic Assay Medium No. 40 Среда для испытания антибиотиков N 40
11	(М280)	Antibiotic Assay Medium No. 12 (Nystatin Assay Agar) Среда для испытания антибиотиков N 12 (Нистатиновый агар)	22	(М1144)	Antibiotic Assay Medium No. 41 Среда для испытания антибиотиков N 41

 

Состав сред для испытания антибиотиков (грамм/литр)

Среды для испытания антибиотиков (N)
Ингредиенты	1	2	3	4	5	6	8	9	10	11	12	13	19	32	34	35	36	37	38	39	40	41
Коды I.P.>	A	B	C		E		F	H		D			G			I	J
Пептический перевар животной ткани	6,0	6,0	5,0	6,0	6,0	-	6,0	-	-	6,0	10,0	9,4	6,0	10,0	10,0			15,0	5,0	2,5
Гидролизат казеина	4,0	-	-	-	-	17,0	-	17,0	17,0	4,0	-		4,0			15,0	17,0			2,5	9,0
Папаиновый гидролизат соевой муки	-	-	-	-	-	3,0	-	3,0	3,0	-	-					5,0	3,0	5,0
Дрожжевой экстракт	3,0	3,0	1,5	3,0	3,0	-	3,0	-	-	3,0	5,0		4,7	3,0						1,5	20,0	5,0
Мясной экстракт	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	-	1,5	-	-	1,5	2,5		2,4	1,5	10,0	10,0				1,5
Глюкоза	1,0	-	1,0	1,0	-	2,5	-	2,5	2,5	1,0	10,0	20,0	10,0	1,0			5,0	2,5	5,5	1,0	10,0	20,0
Натрия хлорид	-	-	3,5	-	-	5,0	-	5,0	5,0	-	10,0		10,0		3,0	3,0		5,0	4,0	3,5
Натрия гидрофосфат	-	-	3,68	-	-	2,5	-	2,5	2,5	-	-
Натрия цитрат																						10,0
Натрия сульфит																			0,2
Калия гидрофосфат																		2,5		3,68		1,0
Калия дигидрофосфат	-	-	1,32	-	-	-	-	-	-	-	-									1,32	2,0	1,0
Марганца сульфат	-	-	-	-	-	0,03	-	-	-	-	-			0,3
Твин-80 (полисорбат)	-	-	-	-	-	-	-	-	10,0	-	-										0,1
Агар-агар	15,0	15,0	-	15,0	15,0	-	15,0	20,0	12,0	15,0	25,0		23,5	15,0		17,0	15,0		15,0		10,0
L-цистеин																			0,7
Глицерин															10,0	10,0
Значение рН (25°С)*	6,6	6,6	7,0	6,6	7,9	7,0	5,9	7,2	7,2	8,3	6,0	5,6	6,1	6,6	7,0	7,0	7,3	7,3	7,0	7,9	6,7	6,9
Навеска (г/л)	30,5	25,5	17,5	26,5	25,5	30,0	25,5	50,0	52,0	30,5	62,5	30,0	60,0	30,8	33,0	50,0	40,0	30,0	45,4	17,5	47,1	46,0
Примечание: * допустимые отклонения от указанного значения ± 0,2

 

Приготовление:

Размешать соответствующее количество порошка (см.таблицу) в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин или следовать указаниям, изложенным на этикетке соответствующей среды.

Принцип и оценка результата:

Указанные среды используются для проведения исследований с антибиотиками. Суть и детали этих исследований изложены в исчерпывающем труде Grove и Randall (1). Исследования с применением жидких сред ранее описаны Schmidt и Moyer (2). Среды для испытания антибиотиков готовятся согласно указаниям, приведенным в американской Фармакопее (3, 4) и других официальных документах (5). Среду N 19 готовят по прописи Kirshbaum и Areet (6). Применение данных сред гарантирует получение соответствующих зон задержки роста у референс-штаммов. При этом необходимо тщательно соблюдать все условия проведения исследований. Применение стандартных питательных сред является одним из важнейших условий для получения адекватных результатов.
Источниками необходимых питательных веществ и факторов роста в средах служат такие ингредиенты, как пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина и/или папаиновый перевар соевой муки, дрожжевой экстракт, мясной экстракт и др. Натрия хлорид обеспечивает необходимое осмотическое давление, фосфаты – буферность (противодействие сдвигу рН). В некоторых средах в качестве источника углерода и энергии присутствует глюкоза. Такие ингредиенты, как сульфат марганца, сульфит натрия, L-цистеин, твин-80, добавлены в некоторые среды в соответствии с питательными потребностями культивируемых микроорганизмов.

Методы исследования

1. Метод цилиндров.
Впервые метод был предложен Abraham и соавт. (7), а затем модифицирован Schmidt и Moyer (2). Суть метода заключается в том, что антибиотик диффундирует из стальных полых цилиндров, установленных вертикально на поверхность засеянного агара. В результате вокруг цилиндра формируется зона задержки роста, величина которой пропорциональна концентрации антибиотика. Обычно этот метод используют для испытания фармпрепаратов пенициллина и других антибиотиков. Для испытания применяют круглые чашки Петри размером 20 х 100 мм и полые стальные или фарфоровые цилиндры длиной 10 мм, имеющие внешний диаметр 8 мм и внутренний диаметр 6 мм (± 0,1 мм). Цилиндры должны быть абсолютно чистыми. При исследовании двухслойным методом посевной (верхний) агар, содержащий тест-культуру, надо вносить после полного затвердевания агаровой основы (нижнего слоя). В большинстве случаев для формирования нижнего слоя требуется 21 мл среды, посевного слоя – 4 мл. На 1 чашку обычно устанавливают до 6 цилиндров, на одинаковом удалении друг от друга и от края чашки.

2.Метод лунок.
В засеянном агаре специальным устройством вырезают лунки, в которые затем вносят растворы антибиотиков. Технология испытания подобна методу цилиндров.

3.Метод бумажных дисков.
Бумажные диски диаметром 9 мм пропитывают раствором антибиотика и накладывают на засеянную питательную среду. Антибиотик можно также нанести на диск, уже помещенный на питательную среду. Для данных исследований можно использовать чашки с толщиной агара 2 мм. Последующие этапы подобны описанным в методе цилиндров. В зависимости от требуемого значения рН можно использовать либо среду N 2, либо среду N 5.

4.Метод серийных разведений.
Антимикробную активность антибиотика можно определять количественно через минимальную ингибирующую концентрацию (МИК). Для этого надо использовать тест-культуру с известной чувствительностью к определенному антибиотику (величиной МИК). Из испытуемого раствора антибиотика готовят серийные (например, двукратные) разведения в одной из указанных жидких сред. Затем в каждое разведение вносят определенное количество тест-культуры. Пробирка с последним разведением, где наблюдается отсутствие мутности (подавляется рост тест-культуры), указывает на активность антибиотика в концентрации, соответствующей величине МИК.

5.Турбидиметрический метод.
Метод основан на измерении мутности в среде с определенной концентрацией антибиотика, что зависит от степени подавления роста тест-культуры. Преимущество, по сравнению с методом цилиндров, состоит в более коротком инкубировании (3-4 ч). Для испытаний используют абсолютно чистые пробирки размером 18 х 150 мм. В них готовят рабочие разведения стандартных («эталонных») препаратов антибиотиков в определенных концентрациях. Затем к 1 мл каждой концентрации добавляют 9 мл засеянного бульона. Одновременно тестируют таким же образом приготовленные растворы испытуемого препарата. Инкубирование пробирок ведут в водяной бане при соответствующей температуре в течение 3-4 ч. Затем останавливают рост добавлением в пробирку 1 капли формалина и измеряют на спектрофотометре степень прозрачности растворов. Концентрацию антибиотика в пробе определяют после сравнения с результатами испытания «эталонного» препарата.

Выбор питательной среды и референс-штаммов: данные представлены в таблице (см. ниже).