Диски с ОНПГ (ONPG)

Используются для быстрого определения β-галактозидазной активности микроорганизмов, что особенно важно при идентификации видов, медленно ферментирующих лактозу.

Принцип и оценка результата:

ОНПГ-диски представляют собой диски из фильтровальной бумаги, пропитанные специальным реактивом – орто-нитрофенил-β -D-галактопиранозидом (ONPG). Для утилизации лактозы микроорганизмы используют 2 фермента. Первый – пермеаза – необходим для переноса молекул лактозы в клетку. Второй – β -галактозидаза – обеспечивает гидролиз поступившей молекулы с образованием глюкозы и галактозы. У истинных лактозоотрицательных микроорганизмов (не ферментирующие лактозу) оба фермента отсутствуют. В то же время встречаются микробные виды, у которых отсутствует только пермеаза, а β -галактозидаза имеется – это т. н. поздно ферментирующие виды. ОНПГ является бесцветным веществом синтетического происхождения (галактопиранозид), которое имеет структурное сходство с лактозой (12). Фермент β -галактозидаза расщепляет ОНПГ с образованием глюкозы и орто-нитрофенила – вещества, имеющего желтый цвет.

Тест с ОНПГ особенно полезен для выявления поздно ферментирующих лактозу микроорганизмов, которые обычно не определяются в общепринятых тестах ферментации лактозы. Ввиду того, что отношение к лактозе широко используется для характеристики энтеробактерий, для их дифференциации применяют также тест с ОНПГ.

Указания по применению:

Внесите один ОНПГ-диск в стерильную пробирку для тестирования. Добавьте 0,1 мл стерильного физиологического раствора хлорида натрия (0,85%, вес/об). Стерильной петлей снимите колонию (рост) испытуемого микроорганизма и эмульгируйте клетки в пробирке с диском ОНПГ в физиологическим растворе. Инкубируйте пробирку с испытуемой суспензией при 35°С. Для выявления лактозоположительных микроорганизмов (быстро ферментирующих лактозу) результат учитывают ежечасно в течение 6 ч. Для выявления медленно ферментирующих лактозу микроорганизмов пробирки с отрицательным результатом продолжают инкубировать до конца 24-часового периода.

Контроль качества:

Культуральные свойства:

Результаты теста с дисками ОНПГ и суспензиями референс-штаммов в физиологическом растворе через 4 ч при 35°С

Примечание: + = положительный результат (желтый цвет суспензии); – = отрицательный результат (бесцветная суспензия и диск).

Условия хранения:

Диски хранить при 0…+8°С. Не используйте реактивы после истечения срока годности

ВНИМАНИЕ: материалы надо держать во влагонепроницаемых контейнерах с поглотителем влаги. Перед тем, как открыть контейнер, надо дать ему нагреться до комнатной температуры.