HiMedia: инструкцияпоприменениюпродукции По всем вопросам обращаться: Почтовый адрес: 124498, Москва, а/я 130. Офис: 123007, Москва, Хорошевское шоссе, д. 13 а, кор.3. Тел/Факс: +7 (495) 940 33 12, 940 33 13, 940 33 14,940 33 96, 940 33 97, 940 33 98. E-mail: himedia@himedialabs.ru Наш сайт: www.himedialabs.ru
DNase Test Agar Base (Granulated) Агар для теста на ДНКазу (гранулированная форма) Продукция зарегистрирована в Министерстве здравоохранения Российской Федерации (ФСЗ 2009/03705).		Кат. № GM482

Применение:

Рекомендуется для выявления дезоксирибонуклеазной активности бактерий и грибов, особенно для идентификации патогенных стафилококков.

           

Состав**:	грамм/литр
Ферментативный гидролизат казеина	15,00
Папаиновый перевар соевой муки	5,00
Деоксирибонуклеиновая кислота (DNA)	2,00
Натрия хлорид	5,00
Агар	15,00

Конечное значение pH (при 25ºС) 7.3 ± 0.2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимых параметров.

Приготовление:

Размешать 42,0г среды в 1000,0 дистиллированной воды. Нагреванием и интенсивным перемешиванием растворить среду полностью. Стерилизовать автоклавированием при 1,1атм. (121^оС) в течение 15минут. Охладить до 45-50^оС и разлить в стерильные чашки Петри. Толуидиновый голубой (FD051) можно добавить в среду перед стерилизацией или непосредственно в чашки после инкубации, как требуется.

Принцип и оценка результата:

Агар для Теста на ДНКазу используется для обнаружения активности дезоксирибонуклеазы бактерий и грибов и, особенно, для идентификации патогенных стафилококков. С добавленным толуидиновым синим эта среда используется в дифференцировании и идентификации непигментированных разновидностей Serratia, выделенных из клинических образцов, которые могли бы быть неправильно идентифицированы как разновидности Enterobacter и Klebsiella.Корреляция между активностью дезоксирибонуклеазы и коагулазной активностью была впервые изучена Weckman и Catlin (1). Jeffries и др. продемонстрировал активность дезоксирибонуклеазы чашечным методом на агаре, используя полусинтетическую питательную среду (5).Положительная активность дезоксирибонуклеазы визуализировалась в виде прозрачных зон вокруг колоний, после того как чашки заливали 1Н раствором соляной кислоты. Di Salvo (2) подтвердил корреляцию между коагулазной активностью и активностью дезоксирибонуклеазы путем введения ДНК в питательную среду вместе с хлоридом кальция для активации фермента. Di Salvo ввел в состав среды ДНК и хлорид кальция для активации фермента дезоксирибонуклеазы. Schreier модифицировал Агар для Теста на ДНКазу добавлением толуидинового синего (3). Эта модифицированная среда   позволяла быстрее идентифицировать Serratia marcescens и позволяла дифференцировать Serratia от других членов Enterobacteriaceae. Ферментативный гидролизат казеина, папаиновый перевар соевой муки обеспечивает необходимые питательные вещества.

Краска (толуидиновый синий) формирует комплекс с ДНК, существующий в питательной среде. Сформированный таким образом комплекс помогает краске сохранить свой оригинальный цвет. Как только ДНК (в комплексе) гидролизуется дезоксирибонуклеазой испытуемых микроорганизмов, комплекс разрушается, и вокруг колоний формируются бесцветные зоны. Это становится заметным при заливании чашки соляной кислотой (4).

Однако в случае толуидинового синего, нуклеотиды, высвободившиеся из-за деполимеризации ДНК, помогают краске приобрести метахроматический цвет, что проявляется формированием розовых к красному зон вокруг колоний. Некоторые штаммы Staphylococci могут ингибироваться на Агаре для Теста на ДНКазу из-за толуидинового синего.

В дальнейшем необходимо выполнить дополнительные анализы, подтверждающие идентификацию.

Контроль качества

Внешний вид порошка:

Кремовая к желтому гранулированная питательная среда

Консистенция готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Базальная среда:cветло-янтарного цвета; после добавления Толуидинового синего (FD051):

В чашках Петри гель синего цвета, прозрачный, с легкой опалесценцией.

Кислотность среды:

При 25°C водный раствор 4,2% (вес/об) имеет рН7.3±0.2

pH готовой среды: 7.10-7.50

Культуральные свойства:

Культуральные свойства референс-штаммов при 35 - 37°C через 18 - 24 часа при добавлении толуидинового синего (FD051).

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	инокулюм (КОЕ)	рост	активность ДНКазы
Serratia marcescens 8100	50-100	обильный	положительно, изменение цвета от синего до розового пурпурного вокруг колоний, когда толуидиновый синий используется / прозрачные зоны окружающие колонии, когда чашки залиты 1N HCL
Staphylococcus aureus 25923	50-100	обильный	положительно, изменение цвета от синего до розового пурпурного вокруг колоний, когда толуидиновый синий используется / прозрачные зоны окружающие колонии, когда чашки залиты 1N HCL
Staphylococcus epidermidis 12228	50-100	обильный	отрицательно
Streptococcus pyogenes 19615	50-100	обильный	положительно, изменение цвета от синего до розового пурпурного вокруг колоний, когда толуидиновый синий используется / прозрачные зоны окружающие колонии, когда чашки залиты 1N HCL
Интерпретация рост культуры как обильный, хороший, слабый, скудный или отсутствие роста, выраженный в % выросших колоний по отношение к количеству засеянных микроорганизмов: Рост культуры (посевная доза 10 2-10 3 КОЕ/мл):   % от засеянных Обильный: >70 %; Хороший: > 40 % но <70 %; Плохой: > 20 % но <40 %; Скудный – слабый: > 10 % но <20%; Скудный: > 10 %; Нет роста: нет видимых колоний.

Условия и сроки хранения:

Сохранять при температуре ниже +30ºС в плотно закрытом контейнере. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2-8ºС.

Источники литературы:

1. Weckman and Catlin, 1957, J. Bact., 73:747.

2. Di Salvo, 1958, Med. Tech. Bull., U.S. Armed Forces Med. J., 9:191.

3. Schreir, 1969, Am. J. Clin. Pathol., 51:711.

5. Jeffries C. D., Holtman F., and Guse D. G., 1957, J. Bacteriol., 73:590. Revision :00 / 2014

4. Streitfeld, Hoffman and Janklow, 1962, J. Bact., 84:77