Спектр продукции ХайСейф и ХайКомби

Два шага в одной процедуре, включающей инокуляцию материала и одновременное выделение изолированных колоний на поверхности плотной фазы.

      

 

HiSafe Blood Culturing System & HiCombi Dual Performance Medium

Система для выделения гемокультур HiSafe и HiCombi

Одним из важнейших материалов, поступающих для исследования в микробиологическую лабораторию, является кровь. Известно, что в норме кровь стерильна, поэтому выделение гемокультуры имеет принципиальное значение для диагностики, в частности, таких состояний, как эндокардит, тифо-паратифозные заболевания и сальмонеллезы, пневмония, осложненный нагноением тромбофлебит, инфекции, связанные с пластикой сосудов и др. (1). Ввиду того, что концентрации микроорганизмов в крови при бактериемиях, как правило, невысоки, для посева необходимо брать достаточно большое количество крови. Естественная бактерицидная/бактериостатическая активность крови, наряду с предшествующей антибиотикотерапией, могут быть причиной отрицательного или несвоевременно полученного положительного результата исследования на гемокультуру (2). Соответственно, для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта можно применять такое вещество, как SPS (натрия полианетолсульфонат) (3, 4, 5). SPS подавляет активность стрептомицина (6), полимиксина В, канамицина и гентамицина. Полезность SPS для выделения гемокультур первыми показали Van Haebler и Miles.

Система для выделения гемокультур HiSafe предназначена для быстрого, эффективного и простого выделения гемокультур и их предварительной идентификации. Все питательные среды, входящие в систему ХайСейф (смотри ниже), специально разрабатывались для выращивания разнообразных клинически значимых микроорганизмов, как неприхотливых, так и прихотливых видов.

Методика

Кровь у больного берут (предпочтительно до назначения антимикробной терапии) стерильным инструментом и асептично переносят во флакон системы HiSafe, содержащий соответствующую питательную среду (выбор среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя). Засеянные флаконы инкубируют в термостате и отмечают появление мутности, изменение цвета среды, гемолиза и/или газообразования.

Взятие материала

  • Кровь берут предпочтительно до назначения антимикробной терапии. Если антибиотики уже назначены, кровь берут непосредственно перед очередным введением антибиотика.
  • Кровь берут натощак, так как хилезная кровь может маскировать рост в жидкой среде.
  • Кровь берут в определенные промежутки времени, особенно рекомендуется это делать при появлении симптомов лихорадки.
  • Может потребоваться многократное взятие крови (2-3 раза) в определенные промежутки времени.
  • Руки персонала должны быть чистыми и сухими. Поскольку имеется опасность заражения персонала такими инфекциями, как гепатит В и ВИЧ-инфекция, оператору следует пользоваться стерильными перчатками.
  • Место инъекции дезинфицируют, тщательно обрабатывая его тампоном, смоченным 70%-ным раствором изопропанола или этанола и 2%-ным раствором иода. Перед введением иглы кожа должна высохнуть.
  • Используя стерильную (лучше одноразовую) иглу, у больного берут следующее количество крови:

Объем крови
Объем жидкой среды
Объем плотной среды
8-10 мл
70 мл
3-5 мл(у детей)
40 мл
20 мл (у детей)
20 мл
7 мл
1-3 мл (у детей)
20 мл (у детей)

 

  • Для каждого больного, а также для повторных пункций используют новую стерильную (лучше одноразовую) иглу и шприц.
  • Для получения наилучших результатов выделения гемокультур отобранную кровь желательно сразу засевать во флаконы системы HiSafe, лучше непосредственно у постели больного.
  • В случае задержки посева исследуемую кровь оставляют при комнатной температуре.

Ход исследования

1. Подписывают флакон со средой для гемокультуры
2. Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки.
3. Открывшуюся часть резиновой пробки дезинфицируют.
4. Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного, как описано выше.
5. Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой.
6. Аэрация: используют стерильную вентиляционную иглу (LA038). На резиновую пробку флакона, установленного вертикально (желательно это делать в ламинарном боксе), помещают смоченный спиртом тампон и через него вводят во флакон вентиляционную иглу с фильтром. Введение и удаление иглы проводят по прямой линии. Иглу удаляют, а содержимое флакона осторожно перемешивают, перевернув флакон 2-3 раза.
Флаконы для культивирования анаэробов вентилированию не подлежат!
7. Инкубируют посевы при 35± 2° С 18-24 ч и далее, в течение 7 суток.

"Увеличить"

Учет результатов

Признаки роста появляются обычно через 48 ч. Для подтверждения отрицательного результата флаконы продолжают инкубировать в течение 7 дней. Для идентификации выделенных гемокультур требуется посев на соответствующие дифференциальные среды.

Примечание: схемы идентификации выделенных гемокультур можно найти в соответствующих Руководствах (7 и др.).

Возможные причины ложного результата

На выделение гемокультуры оказывают влияние разные факторы:

  • Предшествующая антимикробная терапия
  • Транзиторный характер бактериемии
  • Контаминация крови больного из внешних источников
  • Объем отобранной крови
  • Выбор неподходящей среды для культивирования
  • Преждевременное выбрасывание “отрицательных” посевов

Важные указания: используют только для диагностики in vitro.

Не использовать флаконы с трещинами или другими дефектами, а также с признаками контаминации питательной среды. Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121° С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку.

Спектр продукции HiCombi

Два шага в одной процедуре, включающей инокуляцию материала и одновременное выделение изолированных колоний на поверхности плотной фазы.

ДВУХФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ АЭРОБОВ И ФАКУЛЬТАТИВНЫХ АНАЭРОБОВ (универсальные)

Представляет собой флакон (стеклянный или поликарбонатный) с комбинацией 20 / 7 мл агара, омываемого 40 / 20 мл бульона. Бульонные среды богаты факторами роста, что позволяет выращивать как факультативные, так и облигатные анаэробы, вызывающие бактериемию. Специальный пептон является источником различных аминокислот, дрожжевой экстракт – витаминов, а гемин и НАД являются факторами роста таких прихотливых микроорганизмов, как Haemophilus spp. Комбинированная среда рекомендуется для получения быстрого роста энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, стрептококков и грибов Candida.

Двухфазная система HiCombi.
Номер по каталогу LQ012 - для взрослых, LQ033 - для детей.

Рекомендуется для выращивания аэробов, микроаэрофилов и факультативных анаэробов (энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, грибов Candida и др.).
Не рекомендуется для строгих анаэробов.

Состав: (в грамм/литр)
Твердая фаза:
Жидкая фаза:
Двухфазная система HiCombi
Специальный пептон
23,00
23,00
Дрожжевой экстракт
2,00
2,00
Глюкоза
1,00
3,00
Натрия хлорид
5,00
5,00
Натрия пируват
1,00
1,00
Смесь витаминов
1,00
1,02
Буфер
0,70
1,90
Агар
15,00
 
Карагенан
4,00
 
СПС
 
0,25
Конечное значение рН (при 25°С)
7,3±0,2
7,3±0,2


ДВУХФАЗНАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ГРИБОВ

LQ034A (для взрослых)
Двухфазная система ХайКомби для грибов (набор)

Комбинация плотной (20 мл) и жидкой фазы (40 мл) для выделения дрожжевых и плесневых грибов из клинического материала.
Набор включает 10 флаконов с двухфазной системой и 10 флаконов с селективной добавкой FD169A.

FD169A
Добавка СС
, модифицированная

рекомендуется для селективного выделения патогенных грибов.
ВНИМАНИЕ: Селективную добавку FD169A хранить при +2 … 8°С

LQ034 (для детей)
Двухфазная система ХайКомби для грибов (набор)

Комбинация плотной (7 мл) и жидкой фазы (20 мл) для выделения дрожжевых и плесневых грибов из клинического материала.
Набор включает 10 флаконов с двухфазной системой и 10 флаконов с селективной добавкой FD169B.

FD169B
Добавка СС
, модифицированная

рекомендуется для селективного выделения патогенных грибов.
ВНИМАНИЕ: Селективную добавку FD169A хранить при +2 … 8°С

 

БУЛЬОНЫ ХайСейф ДЛЯ АЭРОБНЫХ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

№ по каталогу
Питательная среда (70 мл для взрослых; 20 мл для детей)
LQ003 для детей
LQ003A для взрослых
BHI - Brain Heart Infusion
Cердечно-мозговая вытяжка (бульон)
LQ004 для детей
LQ004A для взрослых
BHI - Supplemented w/ 0.05% SPS
Cердечно-мозговая вытяжка (бульон) с 0,05% СПС
LQ006 для детей
LQ006A для взрослых
Columbia Broth
Колумбийский бульон
LQ010 для детей
LQ010A для взрослых
Glucose Broth Supplemented w/ 0.05% SPS
Сахарный бульон с 0,05% СПС
LQ009 для детей
LQ009A для взрослых
TSB - Tryptone Soya Broth
Триптон-соевый бульон
LQ011 для детей
LQ011A для взрослых
TSB - Tryptone Soya Broth w/ 0.05% SPS
Триптон-соевый бульон с 0,05% СПС
LQ005 для детей
LQ005A для взрослых
TSB - Tryptone Soya Broth w/ 10% Sucrose
Триптон-соевый бульон с 10% сахарозой

 

БУЛЬОНЫ ХайСейф ДЛЯ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

№ по каталогу
Питательная среда (70 мл для взрослых; 20 мл для детей)
LQ008 для детей
LQ008A для взрослых
Schaedler Broth
Бульон Шадлера
LQ007 для детей
LQ007A для взрослых
Thioglycollate Broth
Тиогликолевый бульон
LQ023 для детей
LQ023A для взрослых
Thioglycollate Broth w/ 0.05% SPS
Тиогликолевый бульон с 0,05% СПС
LQ013 для детей
LQ013A для взрослых
Hartley Broth
Бульон Хартли
LQ095 для детей
LQ095A для взрослых
Hartley Broth w/ 0.05% SPS
Бульон Хартли с 0,05% СПС
LQ014 для детей
LQ014A для взрослых
Modified Wilkins Chalgren Broth
Модифицированный бульон Вилкинса-Чалгрена

 

Примечание:
Объем бульона в однофазных системах составляет 20 мл для детей и 70 мл – для взрослых.
Флаконы со средами для аэробов комплектуются специальными иглами с воздушным фильтром.

ОДНОФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ ГЕМОКУЛЬТУР ХайСейф ДЛЯ АЭРОБНЫХ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Состав сред **

Ингредиенты ( г/л)

Сердечно-мозговой бульон.
LQ003A (70 мл)
LQ003 (20 мл)

Сердечно-мозговой
бульон с 0.05% SPS*
LQ004A
(70 мл)
LQ004
(20 мл)

Триптон-соевый
бульон с 10% сахарозы
LQ005A (70 мл)
LQ005 (20 мл)

Колумбийский бульон
LQ006A (70 мл)
LQ006 (20 мл)

Триптон-соевый бульон
LQ009A (70 мл)
LQ009 (20 мл)

Сахарный бульон
с 0,05% SPS*
LQ010A
(70 мл)
LQ010
(20 мл)

Триптон-соевый
бульон с 0.05% SPS *
LQ011A
(70 мл)
LQ011
(20 мл)

Панкреатический перевар желатина
17,5
3,5          
Настой мозга и сердца (порошок)
17,5
17,5          
Протеозопептон
2,0
2,0          
Натрия гидрофосфат
2,5
           
Натрия полианетолсульфонат
0,25
0,5 0,5 0,5 0,25 0,5 0,5
Натрия хлорид
0,39
5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Глюкоза
0,16
2,0 2,5 2,5 2,5 5,0 2,5
Настой мозга теленка   20,0          
Калия гидрофосфат   2,5          
Пиридоксаля гидрохлогид   0,10          
Менадион   0,005          
Ферментативный гидролизат казеина     17,0     10,0 17,0
Папаиновый перевар соевой муки     3,0   3,0   3,0
Дрожжевой экстракт    
2,5
  2,5   2,5
Сахароза     100,0        
Калия гидрофосфат     2,5   2,5   2,5
Гемин     0,005   0,005   0,005
Пептон специальный       10,0      
Биопептон       8,0      
Трис-буфер       3,7      
L-Цистеина гидрохлорид       0,5      
Магния сульфат       0,5      
Железа сульфат       0,02      
Гидролизат казеина         17,0    
Конечное значение pH (при 25°C) 7.4 ± 0.2 7.4 ± 0.2 7.3 ± 0.2 7.5 ± 0.2 7.3 ± 0.2 7.3 ± 0.2 7.3 ± 0.2

 

Примечания: хранить при +2…8°C; *SPS – натрия полианетолсульфонат; ** состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам.

ОДНОФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ ГЕМОКУЛЬТУР ХайСейф ДЛЯ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Состав сред **

Ингредиенты (г/л)
Тиогликолевый бульон
LQ007A (70 мл)
LQ007 (20 мл)
Бульон Шадлера
LQ008A (70 мл)
LQ008 (20 мл)
Бульон Хартли
LQ013A (70 мл)
LQ013 (20 мл)
Бульон
Вилкинса-Чалгрена
модифицированный
LQ014A (70 мл)
LQ014 (20 мл)
Ферментативный гидролизат казеина
15,0
7,5
 
10,0
Дрожжевой экстракт
5,0
5,0
 
5,0
Глюкоза
5,0
 
 
1,0
Натрия хлорид
2,5
1,6
 
5,0
L-Цистин
0,5
0,14
 
 
Натрия тиогликолят
0,5
 
 
 
Натрия полианетолсульфонат
0,5
0,5
 
0,5
Папаиновый перевар соевой муки
 
1,0
 
 
Протеозопептон
 
2,5
 
 
Глюкоза
 
6,5
 
 
Трис-буфер
 
3,0
 
 
Натрия хлорид
 
 
 
 
Калия гидрофофсфат
 
0,2
 
 
Гемин
 
0,01
 
0,005
Триптический перевар сердечной мышцы
 
 
29,0
 
Пептон
 
 
 
10,0
L-Аргинин
 
 
 
1,0
Натрия пируват
 
 
 
1,0
Менадион
 
 
 
0,0005
Конечное значение pH (при 25°C)
7.2 ± 0.2
7.6± 0.2
7.3 ± 0.2
7.3 ± 0.2

 

Примечания: хранить при +2…8°C; ** состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам.

Ход исследования (рекомендуется для всех двухфазных сред HiCombi)

1. Засеять среду, как описано для системы HiSafe.
2. Инкубировать при 35± 2° С в течение 4-6 ч. Наклонить систему так, чтобы поверхность агара была смочена бульоном.
НЕ ВСТРЯХИВАТЬ СИСТЕМУ И НЕ ДЕРЖАТЬ В НАКЛОННОМ ПОЛОЖЕНИИ БОЛЕЕ 15 СЕКУНД.
3. Придать системе вертикальное положение и инкубировать при 35± 2° С в течение 18-24 ч или дольше (при необходимости).
4. Для выделения культур аэробов можно применять аэраторы, как это описано для системы HiSafe.

ДВУХФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ САЛЬМОНЕЛЛ
Простое, Быстрое и Достоверное определение сальмонелл в течение 24 часов

Диагностика заболеваний, вызванных сальмонеллами, рутинными методами обычно занимает 3-4 дня. В первый день материал засевают в тетратионатный или селенитовый бульон. На второй день обогащенную культуру рассевают на Дезоксихолат-цитратном агаре или Ксилозо-лизиновом дезоксихолатном агаре. Затем выросшие подозрительные колонии отбирают и идентифицируют, определяя у чистой культуры уреазную активность и другие биохимические свойства на дифференциальных средах.

В настоящее время компания HiMedia предлагает быструю тест-систему, которая всего лишь за 24 ч позволяет определить возбудителя инфекции. Предлагаемая комбинация питательных сред позволяет проводить обогащение, получать и идентифицировать колонии в течение 24 ч. Ниже представлены различные комбинации таких сред.

Ход исследования

1.Подписывают флакон с двухфазной средой.
2.Для выделения гемокультуры: а) Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки; б) Дезинфицируют открывшуюся часть резиновой пробки; в) Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного общепринятым методом; г) Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой. В случае задержки посева исследуемую кровь оставляют при комнатной температуре.
3.Для другого материала (испражнения, моча, рвотные массы, синовиальная жидкость, гной): засевают непосредственно в жидкую фазу системы, соблюдая правила асептики.
4. Инкубируют засеянные флаконы при 37°С 4-5 ч.
5. Наклоняют флакон на несколько секунд, чтобы засеять таким образом обогащенную в бульоне культуру на поверхность агара.

Учет результатов:

После инкубирования на поверхности агара вырастают черные колонии, бесцветные колонии дают только сальмонеллы серовара Paratyphi A.

         
Двухфазная система HiCombi для сальмонелл

Слева - незасеянная система,
справа - колонии сальмонелл (Salmonella enterica ssp. enterica)
на агаре Гектоен энтерик после 24-часового инкубирования засеянной крови

 

Двухфазные среды для культивирования сальмонелл выпускаются в двух варианатах – для взрослых и для детей

*Двухфазные системы для детей:
жидкая фаза - 7 мл
твердая фаза - 20 мл в одном флаконе
*Двухфазная система для взрослых:
жидкая фаза - 20 мл
твердая фаза - 40 мл в одном стеклянном флаконе
LQ031 Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - DCA
на основе Дезоксихолат-цитратного агара для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ031A Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - DCA
на основе Дезоксихолат-цитратного агара для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ032 Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - HEA
на основе агара «Гектоен энтерик» для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ032A Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - HEA
на основе агара «Гектоен энтерик» для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ029 Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - SS
на основе агара Сальмонелла-Шигелла для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ029A Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - SS
на основе агара Сальмонелла-Шигелла для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ030 Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - XLD
на основе Ксилозо-лизинового дезоксихолатного (КЛД) агара для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ030A Двухфазная система ХайКомби для сальмонелл - XLD
на основе Ксилозо-лизинового дезоксихолатного (КЛД) агара для качественного теста на присутствие сальмонелл; жидкая фаза неселективна
LQ035 Двухфазная селективная система ХайКомби - HEA
на основе среды «Гектоен энтерик» для качественного теста на присутствие сальмонелл; обе фазы селективны
LQ035A Двухфазная селективная система ХайКомби - HEA
на основе среды «Гектоен энтерик» для качественного теста на присутствие сальмонелл; обе фазы селективны
LQ036 Двухфазная селективная система ХайКомби - SS
на основе среды Сальмонелла-Шигелла для качественного теста на присутствие сальмонелл; обе фазы селективны
LQ036A Двухфазная селективная система ХайКомби - SS
на основе среды Сальмонелла-Шигелла для качественного теста на присутствие сальмонелл; обе фазы селективны

 

Примечание: *все системы для гемокультуры хранят при 15–22°С
двухфазные системы LQ012 и LQ033 комплектуются иглами-аэраторами LA038

Важные указания: использовать только для диагностики in vitro.Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку (если она имеется).

Срок годности всех систем для гемокультур - 1 год с момента изготовления.

Вспомогательные материалы

Кат. №
Наименование
Назначение
LА038
HiAerator Needles
Металлические иглы для аэрации - Аэраторы
для аэрации флаконов с рядом сред HiMedia, используемых с целью выделения гемокультуры. представляет собой стерильную металлическую иглу для аэрации флаконов с гемокультурами (двухфазные системы ХайКомби LQ012 и LQ033 комплектуются аэраторами )
Штативы под флаконы для выделение гемокультуры
LA278
Combi System S.S. Rack
Штатив для флаконов с двухфазными средами ХайКомби
для 8 флаконов с двухфазными средами ХайКомби (нержавеющая сталь)
LA279
Safe Blood Culture Bottle S.S. Rack
Штатив для флаконов со средами ХайСейф
для 8 флаконов со средами ХайСейф (нержавеющая сталь)
PW070
Combi System Plastic Rack
Штатив для флаконов с двухфазными средами ХайКомби
Пластмассовый штатив (толщина 4 мм) для 8 флаконов с двухфазными средами ХайКомби
PW071
Safe Blood Culture Bottle Plastic Rack
Штатив для флаконов со средами ХайСейф
Пластмассовый штатив (толщина 4 мм) для 8 флаконов со средами ХайСейф
SS024
Штатив для флаконов со средой HiCombi
для 8 флаконов с двойной средойHiCombi.
SS025
Штатив для флаконов со средой HiSafe
для 8 флаконов HiSafe
PW084
Штатив для флаконов со средой HiCombi
для 8 флаконов с двойной средойHiCombi (штатив толщиной 4 мм)
PW085
Штатив для флаконов со средой HiSafe
для 8 флаконов HiSafe (штатив толщиной 4 мм)