Готовые питательные среды во флаконах для выделения гемокультур

Спектр продукции ХайСейф и ХайКомби

Два шага в одной процедуре, включающей инокуляцию материала и одновременное выделение изолированных колоний на поверхности плотной фазы.

HiSafe Blood Culturing System & HiCombi Dual Performance Medium

Система для выделения гемокультур HiSafe и HiCombi

Одним из важнейших материалов, поступающих для исследования в микробиологическую лабораторию, является кровь. Известно, что в норме кровь стерильна, поэтому выделение гемокультуры имеет принципиальное значение для диагностики, в частности, таких состояний, как эндокардит, тифо-паратифозные заболевания и сальмонеллезы, пневмония, осложненный нагноением тромбофлебит, инфекции, связанные с пластикой сосудов и др. (1). Ввиду того, что концентрации микроорганизмов в крови при бактериемиях, как правило, невысоки, для посева необходимо брать достаточно большое количество крови. Естественная бактерицидная/бактериостатическая активность крови, наряду с предшествующей антибиотикотерапией, могут быть причиной отрицательного или несвоевременно полученного положительного результата исследования на гемокультуру (2). Соответственно, для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта можно применять такое вещество, как SPS (натрия полианетолсульфонат) (3, 4, 5). SPS подавляет активность стрептомицина (6), полимиксина В, канамицина и гентамицина. Полезность SPS для выделения гемокультур первыми показали Van Haebler и Miles.

Система для выделения гемокультур HiSafe предназначена для быстрого, эффективного и простого выделения гемокультур и их предварительной идентификации. Все питательные среды, входящие в систему ХайСейф (смотри ниже), специально разрабатывались для выращивания разнообразных клинически значимых микроорганизмов, как неприхотливых, так и прихотливых видов.

Методика

Кровь у больного берут (предпочтительно до назначения антимикробной терапии) стерильным инструментом и асептично переносят во флакон системы HiSafe, содержащий соответствующую питательную среду (выбор среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя). Засеянные флаконы инкубируют в термостате и отмечают появление мутности, изменение цвета среды, гемолиза и/или газообразования.

Взятие материала

• Кровь берут предпочтительно до назначения антимикробной терапии. Если антибиотики уже назначены, кровь берут непосредственно перед очередным введением антибиотика.
• Кровь берут натощак, так как хилезная кровь может маскировать рост в жидкой среде.
• Кровь берут в определенные промежутки времени, особенно рекомендуется это делать при появлении симптомов лихорадки.
• Может потребоваться многократное взятие крови (2-3 раза) в определенные промежутки времени.
• Руки персонала должны быть чистыми и сухими. Поскольку имеется опасность заражения персонала такими инфекциями, как гепатит В и ВИЧ-инфекция, оператору следует пользоваться стерильными перчатками.
• Место инъекции дезинфицируют, тщательно обрабатывая его тампоном, смоченным 70%-ным раствором изопропанола или этанола и 2%-ным раствором иода. Перед введением иглы кожа должна высохнуть.
• Используя стерильную (лучше одноразовую) иглу, у больного берут следующее количество крови:
  
  

• Для каждого больного, а также для повторных пункций используют новую стерильную (лучше одноразовую) иглу и шприц.
• Для получения наилучших результатов выделения гемокультур отобранную кровь желательно сразу засевать во флаконы системы HiSafe, лучше непосредственно у постели больного.
• В случае задержки посева исследуемую кровь оставляют при комнатной температуре.

Ход исследования

1. Подписывают флакон со средой для гемокультуры
2. Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки.
3. Открывшуюся часть резиновой пробки дезинфицируют.
4. Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного, как описано выше.
5. Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой.
6. Аэрация: используют стерильную вентиляционную иглу (LA038). На резиновую пробку флакона, установленного вертикально (желательно это делать в ламинарном боксе), помещают смоченный спиртом тампон и через него вводят во флакон вентиляционную иглу с фильтром. Введение и удаление иглы проводят по прямой линии. Иглу удаляют, а содержимое флакона осторожно перемешивают, перевернув флакон 2-3 раза.
Флаконы для культивирования анаэробов вентилированию не подлежат!
7. Инкубируют посевы при 35± 2° С 18-24 ч и далее, в течение 7 суток.

Учет результатов

Признаки роста появляются обычно через 48 ч. Для подтверждения отрицательного результата флаконы продолжают инкубировать в течение 7 дней. Для идентификации выделенных гемокультур требуется посев на соответствующие дифференциальные среды.

Примечание: схемы идентификации выделенных гемокультур можно найти в соответствующих Руководствах (7 и др.).

Возможные причины ложного результата

На выделение гемокультуры оказывают влияние разные факторы:

• Предшествующая антимикробная терапия
• Транзиторный характер бактериемии
• Контаминация крови больного из внешних источников
• Объем отобранной крови
• Выбор неподходящей среды для культивирования
• Преждевременное выбрасывание “отрицательных” посевов

Важные указания: используют только для диагностики in vitro.

Не использовать флаконы с трещинами или другими дефектами, а также с признаками контаминации питательной среды. Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121° С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку.

Спектр продукции HiCombi

Два шага в одной процедуре, включающей инокуляцию материала и одновременное выделение изолированных колоний на поверхности плотной фазы.

ДВУХФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ АЭРОБОВ И ФАКУЛЬТАТИВНЫХ АНАЭРОБОВ (универсальные)

Представляет собой флакон (стеклянный или поликарбонатный) с комбинацией 20 / 7 мл агара, омываемого 40 / 20 мл бульона. Бульонные среды богаты факторами роста, что позволяет выращивать как факультативные, так и облигатные анаэробы, вызывающие бактериемию. Специальный пептон является источником различных аминокислот, дрожжевой экстракт – витаминов, а гемин и НАД являются факторами роста таких прихотливых микроорганизмов, как Haemophilus spp. Комбинированная среда рекомендуется для получения быстрого роста энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, стрептококков и грибов Candida.

Двухфазная система HiCombi. Номер по каталогу LQ012 - предназначена для взрослых анализов, LQ033 - предназначена для детских анализов. Рекомендуется для выращивания аэробов, микроаэрофилов и факультативных анаэробов (энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, грибов Candida и др.). Не рекомендуется для строгих анаэробов.
Состав: (в грамм/литр)	Твердая фаза:	Жидкая фаза:
Специальный пептон	23,00	23,00
Дрожжевой экстракт	2,00	2,00
Глюкоза	1,00	3,00
Натрия хлорид	5,00	5,00
Натрия пируват	1,00	1,00
Смесь витаминов	1,00	1,02
Буфер	0,70	1,90
Агар	15,00
Карагенан	4,00
СПС		0,25
Конечное значение рН (при 25°С)	7,3±0,2	7,3±0,2

ДВУХФАЗНАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ГРИБОВ

БУЛЬОНЫ ХайСейф ДЛЯ АЭРОБНЫХ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

БУЛЬОНЫ ХайСейф ДЛЯ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Примечание:
Объем бульона в однофазных системах составляет 20 мл для детских анализов и 70 мл – для взрослых анализов.
Флаконы со средами для аэробов комплектуются специальными иглами с воздушным фильтром.

ОДНОФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ ГЕМОКУЛЬТУР ХайСейф ДЛЯ АЭРОБНЫХ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Состав сред **

Примечания: хранить при +2…8°C; *SPS – натрия полианетолсульфонат; ** состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам.

ОДНОФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ ГЕМОКУЛЬТУР ХайСейф ДЛЯ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Состав сред **

Примечания: хранить при +2…8°C; ** состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам.

Ход исследования (рекомендуется для всех двухфазных сред HiCombi)

1. Засеять среду, как описано для системы HiSafe.
2. Инкубировать при 35± 2° С в течение 4-6 ч. Наклонить систему так, чтобы поверхность агара была смочена бульоном.
НЕ ВСТРЯХИВАТЬ СИСТЕМУ И НЕ ДЕРЖАТЬ В НАКЛОННОМ ПОЛОЖЕНИИ БОЛЕЕ 15 СЕКУНД.
3. Придать системе вертикальное положение и инкубировать при 35± 2° С в течение 18-24 ч или дольше (при необходимости).
4. Для выделения культур аэробов можно применять аэраторы, как это описано для системы HiSafe.

ДВУХФАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ САЛЬМОНЕЛЛ
Простое, Быстрое и Достоверное определение сальмонелл в течение 24 часов

Диагностика заболеваний, вызванных сальмонеллами, рутинными методами обычно занимает 3-4 дня. В первый день материал засевают в тетратионатный или селенитовый бульон. На второй день обогащенную культуру рассевают на Дезоксихолат-цитратном агаре или Ксилозо-лизиновом дезоксихолатном агаре. Затем выросшие подозрительные колонии отбирают и идентифицируют, определяя у чистой культуры уреазную активность и другие биохимические свойства на дифференциальных средах.

В настоящее время компания HiMedia предлагает быструю тест-систему, которая всего лишь за 24 ч позволяет определить возбудителя инфекции. Предлагаемая комбинация питательных сред позволяет проводить обогащение, получать и идентифицировать колонии в течение 24 ч. Ниже представлены различные комбинации таких сред.

Ход исследования

1.Подписывают флакон с двухфазной средой.
2.Для выделения гемокультуры: а) Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки; б) Дезинфицируют открывшуюся часть резиновой пробки; в) Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного общепринятым методом; г) Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой. В случае задержки посева исследуемую кровь оставляют при комнатной температуре.
3.Для другого материала (испражнения, моча, рвотные массы, синовиальная жидкость, гной): засевают непосредственно в жидкую фазу системы, соблюдая правила асептики.
4. Инкубируют засеянные флаконы при 37°С 4-5 ч.
5. Наклоняют флакон на несколько секунд, чтобы засеять таким образом обогащенную в бульоне культуру на поверхность агара.

Учет результатов:

После инкубирования на поверхности агара вырастают черные колонии, бесцветные колонии дают только сальмонеллы серовара Paratyphi A.

Двухфазная система HiCombi для сальмонелл Слева - незасеянная система, справа - колонии сальмонелл (Salmonella enterica ssp. enterica) на агаре Гектоен энтерик после 24-часового инкубирования засеянной крови

Двухфазные среды для культивирования сальмонелл выпускаются в двух варианатах – для взрослых и для детей

Примечание: *все системы для гемокультуры хранят при 15–22°С
двухфазные системы LQ012 и LQ033 комплектуются иглами-аэраторами LA038

Важные указания: использовать только для диагностики in vitro.Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку (если она имеется).

Срок годности всех систем для гемокультур - 1 год с момента изготовления.

Вспомогательные материалы