HiSafe Blood Culturing System

Одним из важнейших материалов, поступающих для исследования в микробиологическую лабораторию, является кровь. Известно, что в норме кровь стерильна, поэтому выделение гемокультуры имеет принципиальное значение для диагностики, в частности, таких состояний, как эндокардит, тифо-паратифозные заболевания и сальмонеллезы, пневмония, осложненный нагноением тромбофлебит, инфекции, связанные с пластикой сосудов и др. (1). Ввиду того, что концентрации микроорганизмов в крови при бактериемиях, как правило, невысоки, для посева необходимо брать достаточно большое количество крови. Естественная бактерицидная/бактериостатическая активность крови, наряду с предшествующей антибиотикотерапией, могут быть причиной отрицательного или несвоевременно полученного положительного результата исследования на гемокультуру (2). Соответственно, для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта можно применять такое вещество, как SPS (натрия полианетолсульфонат) (3, 4, 5). SPS подавляет активность стрептомицина (6), полимиксина В, канамицина и гентамицина. Полезность SPS для выделения гемокультур первыми показали Van Haebler и Miles.

Система для выделения гемокультур HiSafe предназначена для быстрого, эффективного и простого выделения гемокультур и их предварительной идентификации. Все питательные среды, входящие в систему ХайСейф (смотри ниже), специально разрабатывались для выращивания разнообразных клинически значимых микроорганизмов, как неприхотливых, так и прихотливых видов.

  


Двухфазная система HiCombi для сальмонелл
(слева - незасеянная система, 
справа - колонии сальмонелл 
на агаре после 24-часового инкубирования засеянной крови)
 

Методика

Кровь у больного берут (предпочтительно до назначения антимикробной терапии) стерильным инструментом и асептично переносят во флакон системы HiSafe, содержащий соответствующую питательную среду (выбор среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя). Засеянные флаконы инкубируют в термостате и отмечают появление мутности, изменение цвета среды, гемолиза и/или газообразования.

Взятие материала

  • Кровь берут предпочтительно до назначения антимикробной терапии. Если антибиотики уже назначены, кровь берут непосредственно перед очередным введением антибиотика.
  • Кровь берут натощак, так как хилезная кровь может маскировать рост в жидкой среде.
  • Кровь берут в определенные промежутки времени, особенно рекомендуется это делать при появлении симптомов лихорадки.
  • Может потребоваться многократное взятие крови (2-3 раза) в определенные промежутки времени.
  • Руки персонала должны быть чистыми и сухими. Поскольку имеется опасность заражения персонала такими инфекциями, как гепатит В и ВИЧ-инфекция, оператору следует пользоваться стерильными перчатками.
  • Место инъекции дезинфицируют, тщательно обрабатывая его тампоном, смоченным 70%-ным раствором изопропанола или этанола и 2%-ным раствором иода. Перед введением иглы кожа должна высохнуть.
  • Используя стерильную (лучше одноразовую) иглу, у больного берут следующее количество крови:

Объем крови
Объем жидкой среды
Объем плотной среды
8-10 мл
70 мл
3-5 мл(у детей)
40 мл
20 мл
  20 мл (у детей) 7 мл
1-3 мл (у детей)
20 мл (у детей)

 

  • Для каждого больного, а также для повторных пункций используют новую стерильную (лучше одноразовую) иглу и шприц.
  • Для получения наилучших результатов выделения гемокультур отобранную кровь желательно сразу засевать во флаконы системы HiSafe, лучше непосредственно у постели больного.
  • В случае задержки посева исследуемую кровь оставляют при комнатной температуре.

Ход исследования

1. Подписывают флакон со средой для гемокультуры
2. Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки.
3. Открывшуюся часть резиновой пробки дезинфицируют.
4. Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного, как описано выше.
5. Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой.
6. Аэрация: используют стерильную вентиляционную иглу (LA038). На резиновую пробку флакона, установленного вертикально (желательно это делать в ламинарном боксе), помещают смоченный спиртом тампон и через него вводят во флакон вентиляционную иглу с фильтром. Введение и удаление иглы проводят по прямой линии. Иглу удаляют, а содержимое флакона осторожно перемешивают, перевернув флакон 2-3 раза.
Флаконы для культивирования анаэробов вентилированию не подлежат!
7. Инкубируют посевы при 35± 2° С 18-24 ч и далее, в течение 7 суток.

Учет результатов

Признаки роста появляются обычно через 48 ч. Для подтверждения отрицательного результата флаконы продолжают инкубировать в течение 7 дней. Для идентификации выделенных гемокультур требуется посев на соответствующие дифференциальные среды.

Примечание: схемы идентификации выделенных гемокультур можно найти в соответствующих Руководствах (7 и др.).

Возможные причины ложного результата

На выделение гемокультуры оказывают влияние разные факторы:

  • Предшествующая антимикробная терапия
  • Транзиторный характер бактериемии
  • Контаминация крови больного из внешних источников
  • Объем отобранной крови
  • Выбор неподходящей среды для культивирования
  • Преждевременное выбрасывание “отрицательных” посевов

Важные указания: используют только для диагностики in vitro.

Не использовать флаконы с трещинами или другими дефектами, а также с признаками контаминации питательной среды. Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121° С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку.

Двойная среда HiCombi LQ033 для детей и LQ012 для взрослых :

Представляет собой флакон (стеклянный или поликарбонатный) с комбинацией 7мл агара, омываемого 20 мл бульона (LQ033 для детей) 20 мл агара, омываемого 40 мл бульона (LQ012 для взрослых). Бульонные среды богаты факторами роста, что позволяет выращивать как факультативные, так и облигатные анаэробы, вызывающие бактериемию. Специальный пептон является источником различных аминокислот, дрожжевой экстракт – витаминов, а гемин и НАД являются факторами роста таких прихотливых микроорганизмов, как Haemophilus spp. Комбинированная среда рекомендуется для получения быстрого роста энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, стрептококков и грибов Candida.

Состав сред **

Твердая фаза:
Состав: (в грамм/литр)
Специальный пептон 23,00
Дрожжевой экстракт 2,00
Глюкоза 1,00
Натрия хлорид 5,00
Натрия пируват 1,00
Смесь витаминов 1,00
Буфер 0,70
Агар 15,00
Карагенан 4,00
Жидкая фаза:
Состав: (в грамм/литр)
Специальный пептон 23,00
Дрожжевой экстракт 2,00
Глюкоза 3,00
Натрия хлорид 5,00
Натрия пируват 1,00
Смесь витаминов 1,02
Буфер 1,90
СПС 0,25
Конечное значение рН (при 250С) 7,3±0,2
Конечное значение рН (при 250С) 7,3±0,2
 

Ход исследования (рекомендуется для всех двухфазных сред HiCombi)

1. Засеять среду, как описано для системы HiSafe.
2. Инкубировать при 35± 2° С в течение 4-6 ч. Наклонить систему так, чтобы поверхность агара была смочена бульоном.
НЕ ВСТРЯХИВАТЬ СИСТЕМУ И НЕ ДЕРЖАТЬ В НАКЛОННОМ ПОЛОЖЕНИИ БОЛЕЕ 15 СЕКУНД.
3. Придать системе вертикальное положение и инкубировать при 35± 2° С в течение 18-24 ч или дольше (при необходимости).
4. Для выделения культур аэробов можно применять аэраторы, как это описано для системы HiSafe.