Triple Sugar Iron Agar
Трехсахарный железосодержащий агар
M021 / M021I

 

Этот агар используют для дифференциации патогенных кишечных бактерий по их способности ферментировать углеводы и образовывать сероводород.

 

Рост на трехсахарном железосодержащем агаре (M021), слева направо:
1. Контроль (незасеянная среда)
2. Salmonella серовара Typhimurium
3. Escherichia coli
4. Shigella flexneri
5. Salmonella серовара Typhi

 

 

Состав**:

Ингредиенты
М021
грамм/литр
М021I
грамм/литр
Пептический перевар животной ткани
10,00
20,00
Гидролизат казеина
10,00
Дрожжевой экстракт
3,00
3,00
Мясной экстракт
3,00
3,00
Лактоза
10,00
10,00
Сахароза
10,00
10,00
Глюкоза
1,00
1,00
Натрия хлорид
5,00
5,00
Железа сульфат
0,20
Железа цитрат
0,30
Натрия тиосульфат
0,30
Натрия тиосульфат (х 5Н2О)
0,30
Феноловый красный
0,024
0,024
Агар-агар
12,00
12,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2
 
 
 
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 65,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Тщательно перемешать и разлить в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить среду в наклонном положении для формирования скоса и столбика высотой 2,5 см.

Принцип и оценка результата:

Предложенный первоначально Sulkin и Willet (1) этот агар затем был модифицирован Hajna (2) для дифференциации энтеробактерий. Эта пропись соответствует рекомендациям АРНА по исследованию мяса и пищевых продуктов (3), молока и молочных продуктов (4), для подтверждения присутствия сальмонелл (5, 6) и по идентификации грамотрицательных микроорганизмов (6, 7). С небольшими изменениями (касающимися идентификации сальмонелл) эта среда рекомендована международным комитетом по стандартизации (8).

Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой и мясной экстракты являются источником азотистых веществ, серы, микроэлементов, витаминов группы В и др. Хлорид натрия поддерживает оптимальное осмотическое давление. Лактоза, сахароза и глюкоза – ферментируемые субстраты. Тиосульфат натрия в сочетании с ионами железа являются индикатором на сероводород, феноловый красный – индикатор рН.

Микроорганизм, ферментирующий глюкозу, способствует образованию многих кислот, изменяющих цвет среды с красного на желтый. Большее количество кислот освобождается в столбике (при ферментации), по сравнению со скошенной частью (окисление). Бактерии образуют также щелочные продукты (в ходе окислительного декарбоксилирования пептона). Принципиальное значение имеет соотношение глюкоза/лактоза(сахароза) = 1:10. Индикатор феноловый красный становится желтым при значениях рН менее 6,8. При исходном значении рН=7,4 требуется относительно небольшое количество кислот для развития желтого окрашивания среды. Щелочные продукты могут нейтрализовать небольшое количество кислоты, образуемое в скошенной части при ферментации глюкозы. Таким образом, щелочной (красный) скос и кислый (желтый) столбик указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не ферментирует лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие помимо глюкозы лактозу и/или сахарозу, образуют большое количество кислот, которое не может быть нейтрализовано аминами, поэтому скос и столбик будут кислыми (желтыми). Если в ходе ферментации образуется газ, его можно определить по пузырькам и характерным разрывам среды. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода, который, взаимодействуя с ионами железа, образует нерастворимый черный преципитат сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде и почернение обычно бывает в зоне столбика.

Этот агар рекомендуют использовать в сочетании с Уреазным агаром (М112/М111), чтобы провести дифференциацию сальмонелл и протеев. В суммарном виде реакции на среде представлены ниже.

Щелочной скос/кислый столбик = ферментируется только глюкоза;

Кислый скос/кислый столбик = кроме глюкозы, ферментируется лактоза и/или сахароза;

Имеются пузырьки и разрывы в среде = образование газа;

Отмечается черный преципитат = образование сероводорода.

Некоторые энтеробактерии и сероводородпродуцирующие сальмонеллы на этой среде могут не давать реакцию на сероводород. Некоторые бактерии положительно реагируют на сероводород на среде Клиглера и отрицательно – на Трехсахарном железосодержащем агаре. Это связано с подавлением ферментативного пути образования сероводорода в ходе утилизации сахарозы.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет красный цвет, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется скошенный гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (6,5% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост
Скос
Столбик
Газ
Н2S
Citrobacter freundii (8090)
Обильный
Кислота
Кислота
+
+
Enterobacter aerogenes (13048)
Обильный
Кислота
Кислота
+
Escherichia coli (25922)
Обильный
Кислота
Кислота
+
Klebsiella pneumoniae (13883)
Обильный
Кислота
Кислота
+
Proteus vulgaris (13315)
Обильный
Щелочь
Кислота
+
Salmonella paratyphi А
Обильный
Щелочь
Кислота
+
Salmonella typhi (6539)
Обильный
Щелочь
Кислота
+
Salmonella typhimurium (14028)
Обильный
Щелочь
Кислота
+
+
Shigella flexneri (12022)
Обильный
Щелочь
Кислота

Примечание:
"+" почернение (положительная реакция на сероводород)
"–" среда без изменения.

Ссылки:

1. Sulkin E.S. and Willett J.C., 1940, J. Lab. Clin. Med., 25:649.
2. Hajna A.A., 1945, J. Bacteriol, 49:516.
3. Vanderzant C. and Splittstoesser D., (Eds.), 1992, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 3rd ed. APHA, Washington D.C.
4. Marshall R. (Ed.), 1992, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 16th ed., APHA, Washington., D.C.
5. Finegold and Baron, 1986, Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 7th ed., The C.V. Mosby Co., St. Louis.
6. Greenberg A. E., Trussell R. R. and Clesceri L. S. (Eds.), 1985, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 16th ed., APHA, Washington, D.C.
7. MacFaddin J., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
8. International Organization for Standardization (ISO), 1993, Draft ISO/DIS 6579.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.