 |
 |
|||||
|
|
|
Всего посетителей: 3836380
|
|
 
|
Трехсахарный железосодержащий агар
Этот агар используют для дифференциации патогенных кишечных бактерий по их способности ферментировать углеводы и образовывать сероводород.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам Приготовление:Размешать 65,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Тщательно перемешать и разлить в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить среду в наклонном положении для формирования скоса и столбика высотой 2,5 см. Принцип и оценка результата:Предложенный первоначально Sulkin и Willet (1) этот агар затем был модифицирован Hajna (2) для дифференциации энтеробактерий. Эта пропись соответствует рекомендациям АРНА по исследованию мяса и пищевых продуктов (3), молока и молочных продуктов (4), для подтверждения присутствия сальмонелл (5, 6) и по идентификации грамотрицательных микроорганизмов (6, 7). С небольшими изменениями (касающимися идентификации сальмонелл) эта среда рекомендована международным комитетом по стандартизации (8). Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой и мясной экстракты являются источником азотистых веществ, серы, микроэлементов, витаминов группы В и др. Хлорид натрия поддерживает оптимальное осмотическое давление. Лактоза, сахароза и глюкоза – ферментируемые субстраты. Тиосульфат натрия в сочетании с ионами железа являются индикатором на сероводород, феноловый красный – индикатор рН. Микроорганизм, ферментирующий глюкозу, способствует образованию многих кислот, изменяющих цвет среды с красного на желтый. Большее количество кислот освобождается в столбике (при ферментации), по сравнению со скошенной частью (окисление). Бактерии образуют также щелочные продукты (в ходе окислительного декарбоксилирования пептона). Принципиальное значение имеет соотношение глюкоза/лактоза(сахароза) = 1:10. Индикатор феноловый красный становится желтым при значениях рН менее 6,8. При исходном значении рН=7,4 требуется относительно небольшое количество кислот для развития желтого окрашивания среды. Щелочные продукты могут нейтрализовать небольшое количество кислоты, образуемое в скошенной части при ферментации глюкозы. Таким образом, щелочной (красный) скос и кислый (желтый) столбик указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не ферментирует лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие помимо глюкозы лактозу и/или сахарозу, образуют большое количество кислот, которое не может быть нейтрализовано аминами, поэтому скос и столбик будут кислыми (желтыми). Если в ходе ферментации образуется газ, его можно определить по пузырькам и характерным разрывам среды. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода, который, взаимодействуя с ионами железа, образует нерастворимый черный преципитат сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде и почернение обычно бывает в зоне столбика. Этот агар рекомендуют использовать в сочетании с Уреазным агаром (М112/М111), чтобы провести дифференциацию сальмонелл и протеев. В суммарном виде реакции на среде представлены ниже. Щелочной скос/кислый столбик = ферментируется только глюкоза; Кислый скос/кислый столбик = кроме глюкозы, ферментируется лактоза и/или сахароза; Имеются пузырьки и разрывы в среде = образование газа; Отмечается черный преципитат = образование сероводорода. Некоторые энтеробактерии и сероводородпродуцирующие сальмонеллы на этой среде могут не давать реакцию на сероводород. Некоторые бактерии положительно реагируют на сероводород на среде Клиглера и отрицательно – на Трехсахарном железосодержащем агаре. Это связано с подавлением ферментативного пути образования сероводорода в ходе утилизации сахарозы. Контроль качества:Внешний вид порошка:Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок. Плотность готовой среды:Образуется среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю. Цвет и прозрачность готовой среды:Готовая среда имеет красный цвет, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется скошенный гель. Кислотность среды:При 25°С водный раствор (6,5% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2. Культуральные свойства:Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Примечание: Ссылки:1. Sulkin E.S. and Willett J.C., 1940, J. Lab. Clin. Med., 25:649. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
