Dubos Broth Base Основа бульона для микобактерий (по Дюбо)

M067

 

Этот бульон со специальными добавками рекомендуют для приготовления жидкой среды, предназначенной для быстрого выращивания чистых культур Mycobacterium tuberculosis и близких к ним микроорганизмов.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/ литр
Гидролизат казеина	0,50
L-Аспарагин	2,00
Твин-80	0,20
Калия дигидрофосфат	1,00
Натрия гидрофосфат	2,50
Железа аммонийного цитрат	0,05
Магния сульфат	0,01
Кальция хлорид	0,0005
Цинка сульфат	0,0001
Меди сульфат	0,0001
Конечное значение рН (при 25°С) 6,6 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 1,3 г порошка в 180 мл дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина. Прокипятить (при необходимости) для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С и асептично добавить 20 мл стерильного бычьего альбумина V или стерильной сыворотки крови на каждые 180 мл бульонной основы.

Принцип и оценка результата:

Среда дана по прописи Dubos и соавт. (1) и является модификацией ранее предложенной среды (2, 3). Эту основу можно использовать для приготовления разнообразных сред, пригодных для быстрого выращивания туберкулезной палочки. Ценность такой среды в том, что ее можно использовать для изучения противотуберкулезных средств, приготовления инокулюма для заражения животных и т.п. Ее можно использовать в диагностических исследованиях спинномозговой жидкости или плеврального выпота, если предполагается присутствие микобактерий в чистой культуре.

Гидролизат казеина и L-аспарагин являются источником питательных веществ, неорганические соли – ионов, необходимых в метаболических процессах. Твин-80 служит источником жирных кислот для размножения микобактерий. Среда хорошо забуферена (4). Обогащенная сывороткой основа будет давать более обильный рост (в том числе при небольшой посевной дозе), по сравнению со средой, обогащенной альбумином. Кроме того, в присутствии сыворотки рост более дисперсный (в присутствии альбумина рост диффузный). Следует отметить, что ввиду высокой контагиозности микобактерий туберкулеза необходимо соблюдать особую осторожность при обращении с ними.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-бежевый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светло-желтую окраску, прозрачная, без какого-либо преципитата.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (0,65% вес/об) с добавлением 1% глицерина имеет рН 6,6 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-6 недель при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
Mycobacterium tuberculosis H37 Rv (25618)	Хороший или обильный
Mycobacterium kansasii (12478)	Хороший или обильный
Mycobacterium gordonae (14470)	Хороший или обильный
Mycobacterium avium (25291)	Хороший или обильный
Mycobacterium smegmatis (14468)	Хороший или обильный

Ссылки:

1. Dubos, Fenner and Pierce, 1950, Am. Rev. Tuberc. Pulm Dis., 61,66.
2. Dubos and Davis, 1946, J. Exp., Med., 83:409.
3. Dubos and Middlebrook, 1947, Am. Rev. Tuberc., 56:334.
4. MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation - Cultivation - Identification - Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.