 |
 |
|||||
|
|
|
Всего посетителей: 3835897
|
|
 
|
Нитратный агар / бульон
Эти среды рекомендуют для определения нитратредуктазы у бактерий.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам Приготовление:Размешать 21,0 г порошка М072 или 9,0 г порошка М439 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в пробирки. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки со средой М072 в наклонном положении. Принцип и оценка результата:Нитратная среда готовится по прописи, опубликованной американскими бактериологами (1). Способность восстанавливать нитрат является вариабельным признаком и может использоваться для дифференциации и идентификации бактерий, в частности представителей семейства энтеробактерий (2). Недавно международным комитетом Нитратный бульон рекомендован для подсчета Bacillus cereus бродильным методом при 30°С (3). Неферментирующие бактерии и ряд других грамотрицательных палочек варьируют по способности к редукции нитратов. Некоторые из них способны к денитрификации с восстановлением нитрата до газообразного азота. Образование азота из нитрата является важным дифференциальным тестом для ферментирующих глюкозу грамотрицательных бактерий (4). Восстановление нитрата обычно происходит в анаэробных условиях, когда микроорганизмы «отщепляют» кислород из нитрата. Представители Enterobacteriaceae,как правило, восстанавливают нитрат до нитрита, который реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином, в результате чего развивается красное окрашивание (реакций Грисса). Если микроорганизм активно редуцирует нитрат, тест надо проводить раньше, пока образованный нитрит полностью не перешел в газообразный азот. Приготовление реактивов для нитратного теста: 1.Сульфаниловая кислота: растворить 8,0 г сульфаниловой кислоты в 1000 мл 5Н уксусной кислоты. 2.Альфа-Нафтиламиновый реактив: растворить 5,0 г a–нафтиламина в 1000 мл 5Н уксусной кислоты. Предупреждение: реактивы токсичны, требуют осторожного обращения; избегать пипетирования ртом, образования аэрозолей, попадания реактивов на кожу Проведение теста: Внести насколько капель каждого реактива в пробирку с испытуемой культуры. На восстановление нитрата указывает развитие красного или розового окрашивания среды. В качестве отрицательного контроля ставят тест с незасеянной средой. Если покраснения среды нет, добавьте в пробирку щепотку порошка цинка, чтобы убедиться в присутствии нитрата в среде (4). Цинк химическим путем восстанавливает нитрат, что сопровождается развитием красного окрашивания (в присутствии тест-реактива). Следует иметь ввиду, что внесение слишком большого количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции. Нитратный тест не является решающим для идентификации. Окончательную идентификацию проводят с учетом морфологических признаков, окраски по Граму, биохимических и серологических характеристик микроорганизма. Контроль качества:Внешний вид порошка:Гомогенный сыпучий желтый порошок. Плотность готовой среды:Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю (М072). Цвет и прозрачность готовой среды:Готовая среда имеет светло-янтарный цвет, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется гель. Кислотность среды:При 25°С водный раствор М072 (2,1% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2, водный раствор М439 (0,9% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2. Культуральные свойства:Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Ссылки:1. Society of American Bacteriologist, ‘Pure Culture Study of Bacteria, 1944, 12 : Leaflet 11: 8. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
|
