Lauryl Tryptose Broth (Lauryl Sulphate Broth) Лаурил-триптозный бульон

M080

 

Эту среду используют для определения колиформных микроорганизмов в воде, молочных и других пищевых продуктов.

Определение колиформных бактерий методом наиболее вероятных чисел на среде Lauryl Tryptose Broth (Lauryl Sulphate Broth) (M080), слева направо: 1. Salmonella серовара Typhimurium 2. Escherichia coli  3. Staphylococcus aureus  4. Контроль (незасеянная среда)

 

Состав**:

Ингредиенты	грамм/ литр
Триптоза	20,00
Лактоза	5,00
Натрия хлорид	5,00
Калия гидрофосфат	2,75
Калия дигидрофосфат	2,75
Натрия лаурилсульфат	0,10
Конечное значение рН (при 25°С) 6,8 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 35,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Разлить в пробирки с поплавками. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. При засеве 1 мл (и менее) использовать среду согласно прописи, а при засеве 10 мл (и более) следует использовать концентрированную (36,5 г на 500 мл) среду.

Принцип и оценка результата:

Эту среду предложили Mallmann и Darby (1). Она рекомендована специалистами АРНА для выявления колиформных бактерий в образцах питьевой и сточных вод (2), а также в образцах пищевых продуктов (3). Среда разрабатывалась с целью получения обильного роста колиформных бактерий и выраженного газообразования при относительно небольшом инокулюме. На ней полностью подавляется рост аэробных спорообразующих бактерий. Cowls (4) показано селективное действие лаурилсульфата в отношении колиформных бактерий. В ходе сравнительных исследований Mallmann и Darby показали преимущества данной среды перед стандартными по количеству выявляемых колиформных бактерий и признаку газообразования. Данная среда рекомендована для определения колиформных бактерий международным комитетом (5).

Триптоза является источником необходимых азот- и углеродсодержащих питательных веществ, сульфата и микроэлементов. Фосфат придает буферность среде, а хлорид натрия обеспечивает оптимальное осмотическое давление. Лаурилсульфат натрия подавляет рост микроорганизмов (кроме колиформных).

Для посева инокулюма объемом 1 мл и менее используют среду обычной концентрации. Если объем инокулюма 10 мл и более, рекомендуется готовить среду двойной концентрации и делать посевы с учетом разведения среды. Засеянные среды инкубируют при 37°С в течение 24-48 ч. Из пробирок с признаками роста материал высевают на две пробирки с той же средой, одну из которых инкубируют при 37°С, другую – при 44°С. Если имеются признаки ферментации в пробирке, инкубированной при 44°С в течение 8-24 ч, проводят тест на индол, добавляя реактив Ковача. Положительный результат теста на индол в пробирке, где имеется газообразование при 44°С, указывает на присутствие Escherichia coli. Если в пробирке, инкубированной при 37°С, через 24 ч нет признаков ферментации, то первоначальную ферментацию рассматривают, как неспецифическую (вызванную микроорганизмами, отличными от колиформных). При хранении в холодильнике (при +2…8°С) среда может мутнеть, но при комнатной температуре она вновь становится прозрачной.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,56% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Газ	Индол (44°С)
Enterobacter aerogenes (13048)	Обильный	+	–
Escherichia coli (25922)	Обильный	+	+
Salmonella typhimurium (14028)	Обильный	–	–
Staphylococcus aureus (25923)	Подавляется	–	–
Enterococcus faecalis (29212)	Подавляется	–	–

Ссылки:

1. Mallmann and Darby, 1941, Am. J. Public Health, 31:127
2. Greenberg A. E., Trussell R. R. and Clesceri L. S. (Eds.), 1985, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 16th ed., A.P.H.A., Washington, D.C.
3. Speck M. (Ed.), 1984, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 2nd ed., APHA, Washington, D.C.
4. Cowls, 1938, J. Am. Water Works Association, 30:979.
5. International Organization for Standardization (ISO), 1991, Draft ISO/DIS 4831.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.