Columbia Blood Agar Base
Основа колумбийского кровяного агара
М144
Columbia Blood Agar Base with 1% Agar
Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара
M144A

 

Эта среда используется в качестве эффективной основы для приготовления кровяного, шоколадного агаров, а также различных селективных и дифференциальных сред.

 

 

Рост колоний Staphylococcus aureus на колумбийском агаре (M144)

 

 

Состав**:

Ингредиенты
М144
грамм/литр
М144А
грамм/литр
Пептон (специальный)
23,00
23,00
Крахмал кукурузный
1,00
1,00
Натрия хлорид
5,00
5,00
Агар-агар
15,00
10,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2
   

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 44,0 г порошка М144 или 39,0 г порошка М144А в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 40-50°С и асептично внести указанные ниже термочувствительные ингредиенты.

Для приготовления кровяного агара: стерильную дефибринированную кровь барана (до 5% об/об).

Для приготовления шоколадного агара: стерильную дефибринированную кровь барана (до 10% об/об), прогреть при 80°С в течение 10 мин при постоянном помешивании.

Среду можно сделать селективной путем добавления к стерильной основе различных антимикробных веществ (специальных добавок).

Для культивирования бруцелл: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька с селективной добавкой для бруцелл (FD161).

Для культивирования кампилобактеров: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька с одной из селективных добавок для кампилобактеров (FD006, FD165, FD008, FD090 или FD106) и 1 пузырька с ростовой добавкой для кампилобактеров (FD009).

Для культивирования гарднерелл: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька с селективной добавкой для гарднерелл (FD056).

Для культивирования стрептококков: добавить в 500 мл расплавленной стерильной основы растворенное в воде содержимое 1 пузырька со стрептококковой добавкой (FD030 или FD031).

Тщательно перемешать и разлить среду в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Эту среду разработали Ellner и соавт.(1). Присутствие специального пептона обеспечивает быстрый и обильный рост на ней даже прихотливых микроорганизмов. Кроме того, на ней вырастают типичные колонии, лучше проявляется пигментообразование и более четкие гемолитические реакции. Колумбийский агар используют для приготовления кровяных и селективных сред с различными сочетаниями антибиотиков.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и одновременно нейтрализует токсические метаболиты. Баранья кровь позволяет оценить способность микробов к гемолизу и обеспечивает их гемином (Х фактором), который необходим для роста многих бактерий. Вместе с тем в среде нет фактора V (никотинамидадениндинуклеотида), поэтому Haemophilus influenzae, имеющие потребность в обоих факторах (Х и V), на этой среде расти не будут. Ввиду относительно высокого содержания углеводных компонентов бета-гемолитические стрептококки могут давать на этой среде зеленоватые зоны гемолиза, которые можно ошибочно принять за альфа-гемолиз. В этой связи для подтверждения требуется проведение дополнительных тестов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному (М144) или 1%-ному (М144А) агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. После добавления к основе стерильной дефибринированной крови (до 5% об/об) среда имеет вишнево-красный цвет и опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М144 (4,4% вес/об) или М144А (3,9% вес/об) имеют рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35-37°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)
Рост
Гемолиз
Neisseria meningitidis (13090)
Обильный
Staphylococcus aureus (25923)
Обильный
Бета или гамма
Staphylococcus epidermidis (12228)
Обильный
Гамма
Streptococcus pneumoniae (6303)
Обильный
Альфа
Streptococcus pyogenes (19615)
Обильный
Бета

Ссылки:

1. Ellner, Stoessel, Drakeford and Vasi, 1966, Am. J. Clin. Pathol., 45:502

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.