Бульон и агар с ацетамидом

Бульон и агар c ацетамидом применяют для дифференциации грамотрицательных неферментирующих бактерий, в частности Pseudomonas aeruginosa.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 7,63 г порошка M148 (часть Б) или 22,63 г порошка M1033 (часть Б) в 1000 мл дистиллированной воды. Добавить в соответствующую среду 10 г порошка из части А. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Разлить среду в пробирки или флаконы в необходимом количестве. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки с агаром в наклонном положении для формирования скоса.

Принцип и оценка результата:

Среды с ацетамидом рекомендуются, например, соответствующей инструкцией АРНА по исследованию воды (1). Используя минеральную основу сред, Gilardi и соавт. показали, что ацетамид утилизируют многие неферментирующие бактерии (2, 3). Указанные среды содержат неорганические соли и ацетамид в качестве единственного источника углерода и азота. Растущие на среде микроорганизмы дезаминируют ацетамид (проявляя ациламидазную активность)(4, 5). Этим свойством обладают Pseudomonas aeruginosa, Achromobacter xylosoxidans и “Alcaligenes odorans”(6). В результате дезаминирования ацетамида образуется аммиак, сдвигающий рН в щелочную сторону. Среда, соответственно, меняет цвет с желто-оранжевого на лилово-красный. У некоторых медленно ферментирующих штаммов эти изменения появляются лишь к 7 суткам. Положительную реакцию дают примерно 40% штаммов P.aeruginosa, обладающих пиоцианином, поэтому в случае отрицательного результата с ацетамидом необходимы дополнительные дифференциальные тесты.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Часть А: бесцветные расплывающиеся кристаллы.

Часть Б: гомогенный сыпучий розовый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М1033).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет оранжевую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках или чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М148 (смесь из 1% вес/об части А и 0,76% вес/об части Б) имеет рН 7,0 ± 0,2, а водный раствор М1033 (смесь 1% вес/об части А и 2,263% вес/об части Б) – рН 6,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 4-7 дней при 35-37°С.

Примечание:
"+" - изменение окраски на лилово-красную (в течение 7 суток);
"–" - отсутствие лилово-красного окрашивания (в течение 7 суток).

Ссылки:

1. Eaton A., Clesceri L. and Greenberg A. (Eds.), 1995, Standard Method for the Examination of Water and Wastewater, 19th ed., APHA, Washington, DC.
2. Gilardi, 1974, Antonie Van Leeuwenhoek, J. Microbiology Serol., 39:229.
3. Stainier, Palleroni and Doudoroff, 1966, J. Gen. Microbiol., 43:159.
4. Pickett M.J. and Pedersen M.M., 1970, Can. J. Microbiol., 16 : 351.
5. Pickett M.J. and Pedersen M.M., 1970, Can. J. Microbiol., 16 : 401.
6. Oberhofer and Rowen, 1974, Appl. Microbiol., 28:720.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.