Основа среды Левенштейна–Йенсена без крахмала

Среда Левенштейна–Йенсена без крахмала рекомендуется для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 7,24 г порошка в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина (для некоторых видов микобактерий глицерин не добавлять). Прокипятить до полного растворения компонентов среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121⁰С) в течение 15 мин. Приготовить стерильно 1000 мл эмульсии яиц. Асептически смешать 600 мл основы среды и 1000 мл яичной эмульсии до однородного состояния. Внести добавку Графта (Gruft Micobacterial Supplement FD053), если это необходимо. Разлить по пробиркам. Поместить пробирки в наклонном положении для формирования скошенной среды и прогревать (для коагуляции) при 85⁰С в течение 45 мин.

Принцип и оценка результата:

Оригинальная пропись Левенштейна (1) была модифицирована Йенсеном (1), а Графт изменил среду добавлением двух антимикробных агентов (3,4). Основа среды Лвенштейна-Йенсена без крахмала рекомендована ВОЗ для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам. Среда Левенштейна-Йенсена без картофельного крахмала, с внесенными в нее препаратами, модифицирована и рекомендована для применения Международным союзом против туберкулеза. Среда, приготовленная на яичной основе, поддерживает рост различных видов микобактерий. Малахитовый зеленый, бензилпенициллин и налидиксовая кислота предотвращают рост большинства представителей сопутствующей флоры, в первую очередь той флоры, которая дает рост много раньше, чем микобактерии. РНК действует как стимулятор роста и позволяет повысить уровень высеваемости. Если могут быть выделены культуры бычьего или других глицерофобных видов микобактерий, глицерин добавлять не нужно. Малахитовый зеленый является не только ингибитором роста, но и pH-индикатором. Появление синих зон указывает на повышение кислотности за счет роста грамположительных контаминантов (например, Streptococcus spp.), желтые зоны выявляют контаминацию грамотрицательными бациллами.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок зеленовато-синего цвета.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светлый голубовато-зеленый цвет с гладкой, слегка опалесцирующей поверхностью.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-4 недели при 35⁰С в атмосфере 5 - 10% углекислого газа.

Ссылки:

1.Lowenstein E., 1931, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 120:127.
2.Jensen K.A., 1932, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 125:222.
3.Jensen K.A., Towards, a standardization of Laboratoy methods. Second report of the Sub committee of laboratory methods of the IUAT. BILL Int Union Tuberc. 1955:25 (1-2): 89-104.
4.World Health Organization laboratory services in tuberculosis control, part III culture. Geneva 1998: Publication No. WHO/TB/98:258.
5.International Unit Against Tuberculosis and Lung Disease.Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. Minimum requirments. Role and operation in low-income country, Paris 1998.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже 30 °С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре 2…8°С.