 |
 |
|||||
|
|
|
Всего посетителей: 3836454
|
|
 
|
Основа агара Борде-Жангу
Агар Борде-Жангу рекомендуют для выделения культур Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Его можно использовать при подозрении на коклюш, в том числе для посева методом “кашлевых пластинок”. Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам Приготовление:Размешать 40,0 г порошка М175 или 36,0 г порошка М175А или 30,0 г порошка М214 в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45-50°С и асептично внести до 15-20% стерильную дефибринированную кровь (баранью, кроличью, человеческую или лошадиную). Тщательно перемешать, не допуская образования пузырьков воздуха в среде, и разлить среду в чашки Петри. Принцип и оценка результата:Этот агар впервые был предложен Борде и Жангу (1). Указанная пропись является модификацией Kendrick (2), которая рекомендована специалистами АРНА. Данные среды применяют для диагностики коклюша. На них при посеве отделяемого глотки, мазков из носоглотки или методом «кашлевых пластинок» можно выделить возбудитель коклюша – Bordetella pertussis. Картофельный настой и пептический перевар животной ткани являются источником углерода и азота, глицерин и кровь – дополнительными источниками питательных веществ. Ввиду богатого состава эти среды позволяют получать обильный рост бордетелл, их можно использовать для приготовления биомассы бактерий в ходе приготовления коклюшной вакцины (3) или для сохранения лабораторных штаммов бордетелл (1). Обогащение среды 15% бараньей крови преследует цель обнаружения Bordetella pertussis по способности к гемолизу. Добавление 25% человеческой крови позволяет определить присутствие микобактерий в небольшом количестве мокроты, а также определить их чувствительность к стрептомицину (4). Инкубирование засеянных сред рекомендуют проводить во влажной атмосфере (60%, в камере) при 37°С до 7 суток. Перед посевом среда не должна быть слишком сухой. Через 40 ч колонии Bordetella pertussis выглядят гладкими, выпуклыми, блестящими, с зоной гемолиза. Эти среды можно сделать селективными для бордетелл, если в их состав ввести антибиотик, например, пенициллин (5), метициллин (6) или, что особенно рекомендуется, цефалексин (7). Последний используют в концентрации 40 мкг/мл. В качестве противогрибкового средства в среду можно добавить амфотерицин В (10 мкг/мл). Контроль качества:Внешний вид порошка:Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок. Плотность готовой среды:Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному (М175, М214) или 1,6%-ному (М175А) агаровому гелю. Цвет и прозрачность готовой среды:Основа среды имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. После добавления крови (15% об/об) среда должна иметь вишнево-красный цвет и опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель. Кислотность среды:При 25°С водные растворы М175 (4,0% вес/об), М175А (3,6% вес/об) или М214 (3,0% вес/об) имеет рН 6,7 ± 0,2. Культуральные свойства:Ростовые характеристики референс-штаммов через 3-4 дня при 35°С.
Ссылки:1. Bordet J. and Gengou O., 1906, Ann. Inst. Pasteur, 20:731. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
|