Middlebrook 7H10 Agar Base Основа агара Миддлбрука 7H10

M199/M196

 

Основа агара Миддлбрука 7Н10, обогащенная добавкой OADC, рекомендуется для выделения, выращивания и определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis

Состав**:

Ингредиенты	M199 грамм/литр	M196 грамм/литр
Аммония сульфат	0,50	0,50
L-Глутаминовая кислота	0,50	0,50
Калия дигидрофосфат	1,50	1,50
Натрия гидрофосфат	1,50	1,50
Натрия цитрат	0,40	0,40
Железа аммонийного цитрат	0,04	0,04
Магния сульфат	0,025	0,025
Кальция хлорид	0,0005	–
Цинка сульфат	0,001	–
Меди сульфат	0,001	–
Пиридоксина гидрохлорид	0,001	0,001
Биотин	0,0005	0,0005
Малахитовый зеленый	0,00025	0,00025
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,6 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 19,47 г среды М199 или 19,49 г среды М196 в 900 мл дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина. Прокипятить до полного растворения компонентов. Разлить по 180 мл во флаконы и стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121⁰С) в течение 10 мин. В каждый флакон со стерильной охлажденной средой асептически добавить 20 мл ростовой добавки FD018 (Middlebrook OADC Growth Supplement - FD018). Хорошо перемешать и разлить по пробиркам.

ВНИМАНИЕ! Готовую среду до и после инокуляции хранить в темноте!

Принцип и оценка результата:

Эти среды используются для выделения и культивирования M.tuberculosis. Дюбо и Миддлбрук (1) разработали различные составы питательных сред, содержащих олеиновую кислоту и альбумины, предохраняющие микобактерии от воздействия токсичных веществ и способствующие их росту. Миддлбрук и Кон (2,3) усовершенствовали среду на основе олеиновой кислоты и альбуминов и обнаружили более быстрый и обильный рост туберкулезных бацилл на среде 7Н10. Кубика и Дай (4)показали более низкий уровень контаминации среды 7Н10 сопутствующей флорой по сравнению со средами, содержащими яичную эмульсию.

Эти среды содержат много неорганических солей, которые помогают росту микобактерий. Лимонная кислота, получающаяся из цитрата натрия, сохраняет уровень неорганических ионов в растворе. Глицерин является источником энергии и углерода.

Добавка FD018 содержит олеиновую кислоту, альбумин, хлористый натрий, глюкозу и каталазу. Олеиновая кислота и другие высокомолекулярные жирные кислоты составляют неотъемлемую часть метаболизма микобактерий, глюкоза используется как источник энергии. Каталаза нейтрализует токсичные перекиси, альбумин предохраняет туберкулезные бациллы от воздействия других токсичных агентов. Малахитовый зеленый ограничивает рост других микроорганизмов (5,6).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок светло-зеленого цвета.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5% агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Нежно-янтарного цвета, слегка опалесцирующий гель с зеленоватым оттенком.

Кислотность среды:

При 25⁰С водный раствор (1,95% вес/об ) имеет pH 6,6+0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-4 недели при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
M.tuberculоsis H37 Rv(25618)	Обильный или хороший
M.smegmatis(14468)	Обильный или хороший
M.fortuitum(6841)	Обильный или хороший

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже 25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре 2…8°С.