 |
 |
|||||
|
|
|
Всего посетителей: 3835918
|
|
 
|
Основа агара для теста на фенилкетонурию
Этот агар рекомендован для оценки содержания фенилаланина в крови при определении фенилкетонурии (ФКУ). Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам Приготовление:Размешать 50,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 50°С, добавить споры Bacillus subtilis и 3,3 мг В-2-тиенилаланина (к среде М398). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри. Принцип и оценка результата:Эта среда разработана Demain (1). Guthrie и Tieckelmann (2, 3, 4) модифицировали тест подавления для исследования образцов крови новорожденных с целью раннего выявления фенилкетонурии при низких уровнях фенилаланина в крови путем определения уровней сывороточного фенилаланина или уровня фенилпирувата в моче. ФКУ является врожденным дефектом, вызванным отсутствием фермента фенилаланингидроксилазы. При этом состоянии фенилаланин накапливается в крови и выделяется с мочой (фенилкетонурия), развивается повреждение мозга и замедляется развитие индивидуума. Данный агар является синтетической средой определенного состава, в который добавляется В-2-тиенилаланин. Он является агаровой основой для проведения тестов с образцами крови. Этот тест основан на том, что рост бактерий Bacillus subtilis обычно подавляется в присутствии В-2-тиенилаланина, но при добавлении в среду L-фенилаланина отмечается хороший рост (в результате конкурирующего влияния L-фенилаланина). Уровень фенилаланина в крови можно определить по наличию роста указанной культуры. Кроме фенилаланина могут быть использованы пролин, фенилпируват или фениллактат. Небольшие диски фильтровальной бумаги, пропитанные кровью пациента, укладывают на данный агар с В-2-тиенилаланином, засеянный культурой Bacillus subtilis. Контрольные диски, пропитанные различными концентрациями L-фенилаланина (2, 4, 6, 8, 10, 12 и 20 мг%) также укладывают на ту же среду. После инкубирования в течение ночи сравнивают диаметры зон роста вокруг опытного и контрольных дисков. Зона, соответствующая уровню 4 мг% или более, оценивается как предварительный положительный результат. Повторные исследования с двойными дисками, химическое или спектрофотометрическое исследования позволяют уточнить результат (5, 6). Контроль качества:Внешний вид порошка:Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок. Плотность готовой среды:Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю. Цвет и прозрачность готовой среды:Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель. Кислотность среды:При 25°С водные растворы М282 или М398 (5,0% вес/об) имеют рН 7,0 ± 0,2. Культуральные свойства:Ростовые характеристики референс-штамма через 12-16 ч при 35-37°С.
Ссылки:1. Demain A.L., 1958, J. Bact., 75:517. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить не рекомендуется.
|