EMB Agar / Broth
Агар с эозином и метиленовым синим (EMB) / Бульон с эозином и метиленовым синим
М317
 
М503

 

Эти среды рекомендуют для выделения и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы из клинического и другого материала.
 

 

EMB Agar (M317) Рост Escherichia coli

 

 

Состав**:

Ингредиенты
М317
грамм/литр
М503
грамм/литр
Пептический перевар животной ткани
10,00
10,00
Калия гидрофосфат
2,00
2,00
Лактоза
5,00
5,00
Сахароза
5,00
5,00
Эозин Y
0,40
0,40
Метиленовый синий
0,065
0,065
Агар-агар
13,50
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0,2
 
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 36,0 г порошка М317 или 22,5 г порошка М503 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть для полного растворения частиц. Разлить в соответствующие емкости. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Остудить до 50°С и встряхнуть для окисления метиленового синего (чтобы восстановить его синий цвет и размешать хлопьевидный преципитат). Если среда используется в тот же день, ее можно не автоклавировать.

Предупреждение: среду надо хранить в темноте, чтобы не допустить ее окисления на свету.

Принцип и оценка результата:

Эта среда впервые предложена Holt-Harris и Teague (1), а затем модифицирована Levine (2). Приведенные прописи являются комбинацией указанных сред: в их состав входит Пептический перевар животной ткани и фосфат по Левину и два углевода, предложенные первыми авторами.

Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Данные красители служат в качестве дифференцирующими индикаторами ферментации углеводов. Соотношение эозина и метиленового синего доведено примерно до 6:1. Сахароза добавляется в среду в качестве альтернативного углевода для типичных грамотрицательных бактерий, ферментирующих лактозу медленно или иногда не ферментирующих ее. Колиформные микроорганизмы образуют на этой среде лилово-черные колонии в соответствии с окраской указанных индикаторов при низких значениях рН. Комплекс красителей при этом сорбируется материалом колонии. Неферментирующие микроорганизмы вероятно повышают рН окружающей среды за счет окислительного дезаминирования белка, что ведет к растворению комплекса метиленовый синий–эозин и формированию бесцветных колоний (3). В присутствии эозина и метиленового синего не могут расти некоторые штаммы сальмонелл и шигелл. Для дальнейшей идентификации выделенных культур требуется проведение дополнительных тестов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю (М317).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет красновато-лиловую окраску, опалесцирует с зеленоватым оттенком, если в чашках Петри или пробирках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М317 (3,6% вес/об) или М503 (2,25% вес/об) имеют рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост
Цвет колоний на среде М317
Escherichia coli (25922)
Обильный
Лиловые с черным центром
и зеленым металлическим блеском
Proteus mirabilis (25933)
Обильный
Бесцветные
Salmonella typhimurium (14028)
Обильный
Бесцветные
Enterobacter aerogenes (13048)
Хороший
Розовые без блеска
Klebsiella pneumoniae (13883)
Хороший
Розовые слизистые
Staphylococcus aureus (25923)
Подавляется

Ссылки:

1. Holt-Harris and Teague,1916, J. Infect. Dis., 18 : 596.
2. Levine, 1918, J. Infect. Dis., 23:43.
3. Howard B.J., 1994, Clinical and Pathogenic Microbiology, 2nd ed., Mosby Year Book, Inc.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С в темноте.