Угольный агар / Основа кровяно-угольного агара

Угольный агар с добавками рекомендуют для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины и также для сохранения лабораторных культур этих микроорганизмов.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 31,25 г порошка М344 в 450 мл или 54,50 г порошка М646 или 51,00 г порошка М1053 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить при постоянном помешивании для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45-50°С. Асептично внести 50 мл стерильной дефибринированной крови и селективную добавку для бордетелл (FD004) в среду М344 или в среду М1053. В среду М646 (на каждые 100 мл) добавить 10 мл стерильной дефибринированной лошадиной крови, 0,3 мл стерильного раствора пенициллина (100 ЕД/мл) и 0,3 мл 0,1%-ного раствора 4,4-диамидодифениламина гидрохлорида.

Принцип и оценка результата:

Угольный агар соответствует прописи, предложенной для метода Mishulow и соавт.(1), и рекомендуется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины. Потребность в никотиновой кислоте, как ростовом факторе, показана Proom (2). Для производства коклюшной вакцины Ensminger и соавт.(3) заменили среду Борде-Жангу на угольный агар.

Такие компоненты, как настой говяжьего сердца, мясной и дрожжевой экстракты, желатиновый пептон, дают необходимые питательные вещества. Хлорид натрия создает оптимальное осмотическое давление. Сложность выделения чистых культур коклюшного микроба из носоглоточной слизи состоит в необходимости подавления сопутствующей микрофлоры в течение длительного инкубационного периода на высокопитательной среде. Для подавления нежелательного роста в среду можно добавить пенициллин. Однако, по данным Lacey (4), часть сопутствующей флоры остается из-за устойчивости к пенициллину. Как показали Broome и соавт. (5), метициллин превосходит пенициллин по ингибирующему действию на назофарингеальную микрофлору, а, по данным Sutcliffe и Abbott (6), цефалексин лучше, чем метициллин. Далее Regan и Lowe (7) показали, что селективной средой может быть основа кровяно-угольного агара половинной концентрации с цефалексином. Основа кровяно-угольного агара используется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины.

Скошенную среду можно также использовать для сохранения лабораторных культур указанных микроорганизмов (с еженедельными пересевами). Угольный агар или Угольный агар с ниацином можно превратить в шоколадный агар для выделения видов Haemophilus.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий серый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,8%-ному (М344) или 1,2%-ному (М646 и М1053) агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среды имеют черную окраску, опалесцирует при затвердевании и содержат нерастворимые в воде черные частицы угля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М344 (6,25% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, раствор М646 (5,45% вес/об) имеет рН 7,5 ± 0,2, а раствор М1053 (5,1% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 37°С.

Ссылки:

1. Mishulow L., Sharpe L. S. and Cohen L. L., 1953, J. Pub. Hlth., 43((II) : 1466.
2. Proom H., 1955, J. Gen. Microbiol., 12(I) : 63.
3. Ensminger P. W., Gulberston C. G. and Powell H. M., 1953. J. Infect. Dis., 93(3):266
4. Lacey B.W., 1954, J. Hyg., 59:273.
5. Broome C.V., Fraser D.W. and English J.W., 1979, Internat. Symp. on Pertussis DHEW J., Washington D.C. pp 19-29.
6. Sutcliffe E.M. and Abbott J.D., 1979, B.M.J. II:732-733.
7. Regan and Lowe F., 1977, J. Clin. Microbiol., 6:303.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.