Indole Nitrate Medium (Tryptone Nitrate Medium) Индол-нитратная среда

М364

 

Этот бульон используют для идентификации микроорганизмов на основе определения у них способности восстанавливать нитрат и образовывать индол.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина	20,00
Натрия гидрофосфат	2,00
Глюкоза	1,00
Калия нитрат	1,00
Агар-агар	1,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 25,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Принцип и оценка результата:

Среда готовится по прописи, приведенной в американской фармакопее (1). Питательный состав среды позволяет расти на ней аэробам, микроаэрофилам, факультативным и облигатным анаэробам. При этом у широкого круга микроорганизмов можно одновременно определять одновременно 2 признака – редукцию нитрата и индолообразование.

Гидролизат казеина содержит триптофан, разложение которого некоторыми микроорганизмами приводит к образованию индола. Нитрат калия служит субстатом для нитратредуктазы, имеющеейся у ряда микроорганизмов. Для того, чтобы проводить тесты на индол или нитратредуктазу через разные промежутки времени, можно засеять испытуемой культурой несколько пробирок со средой. Нитратный тест проводят, добавляя в пробирки по 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и a-нафтиламина (R009). На восстановление нитрата (положительная реакция) указывает появление красно-фиолетового окрашивания. Если цвет среды не изменяется, для подтверждения отрицательного результата в пробирку вносят щепотку цинковой пыли. Появление красно-фиолетового окрашивания свидетельствует о том, что нитрат не восстановлен (реакция отрицательна). Образование индола можно определить путем добавления в пробирку реактива Ковача (R008) или реактива Эрлиха (R005) (2, 3). Развитие темно-красного окрашивания реактива после легкого встряхивания свидетельствует о положительном результате теста на индол. Эту среду не рекомендуют использовать для энтеробактерий, так как они, как правило, восстанавливают нитрат, что затрудняет определение индола (4).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,1%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется столбики геля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2,5% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Индол	Редукция нитрата
Clostridium perfringens (11437)	Обильный	–	–
Clostridium sporogenes (12924)	Обильный	–	+
Clostridium sordelii (9714)	Обильный	+	–
Escherichia coli (25922)	Обильный	не применяют	+
Staphylococcus aureus (25923)	Обильный	–	+

Ссылки:

1. The United States Pharmacopeia, 2002, USP 2S/NF 20, Asian Edn., USP Convention, Rockville, MD.
2. MacFaddin J.F., 1980, Biochemical tests for Identification of Medical Bacteria, 2nd ed., Williams and Wilkins, Baltimore.
3. Lennette, Balows, Hausler and Shadomy (Eds.), 1985, Manual of Clinical Microbiology, 4th ed., ASM, Washington, D.C.
4. Smith, Rogers and Bettge, 1972, Appl. Microbiol., 23:423.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.