Lysine Iron Agar Лизиновый железосодержащий агар

M377

 

Эту среду используют для дифференциации сальмонелл от других энтеробактерий по признакам декарбоксилирования или дезаминирования лизина и образования сероводорода.

Рост на среде Lysine Iron Agar (M377), слева направо: 1. Salmonella серовара Arizona 2. Escherichia coli 3. Salmonella серовара Typhimurium 4. Proteus mirabilis 5. Контроль (незасеянная среда)

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Пептический перевар животной ткани	5,00
Дрожжевой экстракт	3,00
Глюкоза	1,00
L-Лизин	10,00
Железа аммонийного цитрат	0,50
Натрия тиосульфат	0,04
Бромкрезоловый пурпурный	0,02
Агар-агар	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,7 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 34,56 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в пробирки. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить в наклонном положении для формирования скоса и высокого столбика.

Принцип и оценка результата:

Эту среду разработали Edwards и Fite (1) для определения сальмонелл, ферментирующих лактозу. Известно, что сальмонеллы быстро декарбоксилируют лизин и образуют большое количество сероводорода (2, 3). Данная среда высокочувствительна для определения лактозоотрицательных и лактозоположительных сальмонелл. Многие сальмонеллы за счет быстрой ферментации лактозы подавляют образование сероводорода на таких средах, как Трехсахарный железосодержащий агар (М021). Следовательно, появляется возможность «просмореть» такие культуры, что особенно важно при расшифровке вспышек пищевых инфекций. В специальном исследовании (4) описано выделение сальмонелл из пищевых продуктов с пересевом колоний с селективного агара на две среды параллельно: на Лизиновый железосодержащий агар и Трехсахарный железосодержащий агар (М021). Показано, что на них можно более четко дифференцировать энтеробактерии, например, эшерихии и шигеллы (5, 6) .

Пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ для роста бактерий. Цитрат аммонийного железа и тиосульфат натрия являются индикатором образования сероводорода. Культуры, продуцирующие сероводород, дают почернение среды ввиду образования черного преципитата сульфида железа. Следует отметить что протеи, образующие сероводород на данной среде, не вызывают ее почернение. Декарбоксилирование лизина приводит к образованию амина (кадаверина), что вызывает щелочение среды и появление лилового окрашивания. Микроорганизмы, неспособные декарбоксилировать лизин, вызывают закисление столбика (он становится желтым). Те микроорганизмы, которые дезаминируют лизин, способствуют тем самым образованию a-кетокарбоксильной кислоты, которая реагирует на воздухе (вблизи поверхности скоса) с солью железа, что сопровождается образованием вещества красновато-коричневого цвета.

Культуры засевают уколом в столбик и штрихами по поверхности скоса.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет лиловую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется скошенный гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,45% вес/об) имеет рН 6,7 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Столбик	Скос	Сероводород
Citrobacter freundii (8090)	Обильный	К	Щ	+
Escherichia coli (25922)	Обильный	Щ	Щ	–
Proteus mirabilis (25933)	Обильный	К	Д	+
Salmonella typhimurium (14028)	Обильный	Щ	Щ	+
Shigella flexneri (12022)	Обильный	К	Щ	–
Salmonella arizonae (13314)	Обильный	Щ	Щ	+

Примечание:
"+" - почернение среды;
"–" - отсутствие почернения среды;
"Д" - темно-красный цвет, дезаминирование лизина;
"К" - кислота, желтый цвет;
"Щ" - щелочь, пурпурный цвет, неизменность цвета.

Ссылки:

1. Edward P.R. and Fife M.A., 1961, Appl. Microbiol., 9:478.
2. Moeller V., 1954, Acta Pathol. Microbiol. Scand., 355:259.
3. Ewing W.H., Davis B.R. and Edward P.R., 1960, Pub. Hlth. Labs., 18:77.
4. Thatcher F.S. and Clark D.S., 1968, University of Toronto Press, p. 100.
5. Johnson J.G., Kunz L.J., Barron W. and Ewing W.H., 1966, Appl. Microbiol., 14:212.
6. Finegold S.M. and Martin W.J., 1982, Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 6th ed., The C.V. Mosby Co., St. Louis.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.