M I O Medium Полужидкая среда для определения индола и орнитиндекарбоксилазы

M378

 

Эту среду рекомендуют для идентификации энтеробактерий по подвижности, образованию индола и орнитиндекарбоксилазы.

Рост на среде MIO Medium (M378), слева направо:  1.Escherichia coli  2.Klebsiella pneumoniae  3.Proteus mirabilis  4.Salmonella серовара Typhimurium  5.Контроль (незасеянная среда)

 

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина	10,00
Пептический перевар животной ткани	10,00
Дрожжевой экстракт	3,00
L-Орнитина гидрохлорид	5,00
Глюкоза	1,00
Бромкрезоловый пурпурный	0,02
Агар-агар	2,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,5 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 31,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в пробирки по 5 мл. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки в вертикальном положении.

Принцип и оценка результата:

Эту среду предложил две группы авторов (1, 2) для идентификации энтеробактерий по подвижности, образованию индола и орнитиндекарбоксилазы в одной пробирке.

Гидролизат казеина, пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ и витаминов группы В для роста бактерий. Глюкоза является ферментируемым субстратом, из которого образуются кислые продукты. Посев делают уколом в столбик среды.

Признаки подвижности и орнитиндекарбоксилазной активности учитывают перед тестом на индол. Подвижные микроорганизмы дают диффузный рост, неподвижные растут по ходу укола. Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, закисляют среду, изменяя цвет индикатора бромкрезолового пурпурного с лилового на желтый. При наличии соответствующего фермента орнитин декарбоксилируется с образованием путресцина, который защелачивает среду и изменяет ее цвет с желтого на лиловый по всей среде. При отрицательной реакции на орнитиндекарбоксилазу среда выглядит желтой или имеет лиловую полоску в верхней части столбика. Индол может образоваться из триптофана, присутствующего в гидролизате казеина (3, 4). При добавлении реактива Ковача присутствующий в нем альдегид реагирует с образовавшимся индолом, в результате чего образуется комплекс красного цвета.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,2%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет лиловую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,1% вес/об) имеет рН 6,5 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Подвиж ность	Индол	Орнитин
Enterobacter aerogenes (13048)	Обильный	+	–	+
Escherichia coli (25922)	Обильный	+	+	+
Klebsiella pneumoniae (13883)	Обильный	–	–	–
Proteus mirabilis (25933)*	Обильный	+	–	+

Примечания:
"+" - положительная реакция;
"–" - отрицательная реакция;
"*" - подвижность у Proteus mirabilis имеет температурозависимое выражение (более выражена при 20°С, нежели, чем при 35°С).

Ссылки:

1. Ederer and Clark, 1970, Appl. Microbiol., 20:849.
2. Oberhofer and Hajkowski, 1970, Am. J. Clin. Pathol., 54:720.
3. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria., Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
4. Ewing, 1986, Edwards and Ewing’s ‘Identification of Enterobacteriaceae’, 4th ed., Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.