McBride Listeria Agar Base Основа агара МакБрайда для листерий	M386
Modified McBride Listeria Agar Base Основа агара МакБрайда для листерий модифицированная	M891

 

Этот агар используют для селективного выделения и культивирования Listeria monocytogenes из клинического материала, от персонала пищевых объектов и др.

Состав**:

Ингредиенты	М386 грамм/литр	М891 грамм/литр
Гидролизат казеина	–	5,00
Пептический перевар животной ткани	–	5,00
Триптоза	10,00	–
Мясной экстракт	3,00	3,00
Натрия хлорид	5,00	5,00
Глициновый ангидрид	10,00	10,00
Лития хлорид	0,50	0,50
Фенилэтанол	2,50	2,50
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 46,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до температуры ниже 50°С и перед застыванием асептично добавить в среду М386 стерильную дефибринированную кровь (до конечной концентрации 5% об/об) и в обе среды растворенное в воде содержимое 1 флакончика специальной добавки для листерий (FD171). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Предупреждение: Хлорид лития ядовит, поэтому следует избегать вдыхания порошка и попадания их на кожу. В случае контакта с кожей рекомендуется немедленно промыть большим количеством воды для удаления остатков среды.

Принцип и оценка результата:

Этот агар готовится по прописи McBride и Girard (1) и используется для селективного выделения Listeria monocytogenes от персонала пищевых объектов (2) и из клинического материала (3).

Гидролизат казеина, триптоза, мясной экстракт, пептический перевар животной ткани, мясной экстракт служат источником углерода, азота, минеральных веществ, витаминов В, микроэлементов и других важных факторов роста листерий. Фенилэтилалкоголь избирательно подавляет синтез ДНК, оказывая бактериостатическое действие на грамотрицательные бактерии (4). Глицин подавляет рост некоторых бактерий, включая Escherichia coli и Enterococcus faecalis. Хлорид лития также обладает антимикробной активностью.

Определение Listeria monocytogenes существенно улучшается при использовании одно- или двухэтапного обогащения материала на жидкой среде. В соответствии с одноэтапным методом (5), инфицированный материал засевают непосредственно на Обогатительный бульон для листерий. По двухэтапному методу (6) вначале материал засевают в Триптозный бульон (М177) и инкубируют в холодильнике при 4°С в течение нескольких недель для холодового обогащения (листерии могут размножаться при низких температурах). Затем инокулируют Обогатительный бульон для листерий и, далее, делают высевы на селективный агар, например, модифицированный агар МакБрайда. Подозрительные на листерии колонии отбирают при косопроходящем (45°) освещении. Колонии листерий плотные белые или радужно-белые, имеют вид битого стекла. Мелкие колонии имеют голубоватый оттенок. Колонии других микроорганизмов желтовато-оранжевые. Их можно затем отделить при посеве штрихами на Триптон-соевом агаре с дрожжевым экстрактом. Агар МакБрайда можно использовать в качестве основной среды (с добавлением крови или без нее).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы (4,6% вес/об) имеют рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С в анаэробных условиях.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост*	Рост**
Listeria monocytogenes (19112)	Хороший или обильный	Хороший или обильный
Escherichia coli (25922)	Отсутствует или слабый	Отсутствует или слабый
Pseudomonas aeruginosa (27853)	Отсутствует или слабый	Отсутствует или слабый
Enterococcus faecalis (29212)	Отсутствует или слабый	Отсутствует или слабый

Примечания:
* - с добавлением FD171 (200 мкг/мл циклогексимида);
** - с добавлением крови (до конечной концентрации 5% об/об).

Ссылки:

1. McBride M.E. and Girard K.F., 1960, J. Lab. Clin. Med., 55:153.
2. Vanderzant C. and Splittstoesser D. (Eds.), 1992, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 3rd ed., APHA, Washington, D.C.
3. Finegold S.M., Martin W.J. and Scott E.G., 1978, Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 5th ed., The C.V. Mosby Company, St Louis.
4. Dowell, Hill and Altemeier, 1964, J. Bact., 88:1811.
5. Lovett J. and Hitchins A., 1989, Bacteriological Analytical Manual, 6th ed., Supplement, Sept. 1987, (Second printing, 1989):29.01.
6. McClain D. and Lec. W., 1989, Lab. Comm No. 57, Revised, May 24, 1989, U.S. Dept. of Agric., FSIS, Microbiol. Div., Beltsville, MD.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.