Moeller Decarboxylase Broth Base
Основа бульона для определения декарбоксилаз по Мюллеру
M393
Broth with Lysine Hydrochloride
Бульон с лизином
M687
Broth with Ornithine Hydrochloride
Бульон с орнитином
М688
Broth with Arginine Hydrochloride
Бульон с аргинином
М689

 

Среды используют для дифференциации бактерий по их способности декарбоксилировать аминокислоты.

 

 

Определение лизиндекарбоксилазы на среде Мюллера (M393), слева направо по 2 пробирки: 
Salmonella серовара Enteritidis, Proteus mirabilis, Escherichia coli и контроли (незасеянные среды); 
в 1, 3, 5 и 7 пробирках – бульон с L-лизином, в остальных – основа декарбоксилазного бульона без аминокислот.

 

  

 

Состав**:

Ингредиенты
М393 грамм/литр
М687 грамм/литр
М688 грамм/литр
М689 грамм/литр
Пептический перевар животной ткани
5,00
5,00
5,00
5,00
Мясной экстракт
5,00
5,00
5,00
5,00
Глюкоза
0,50
0,50
0,50
0,50
Бромкрезоловый пурпурный
0,01
0,01
0,01
0,01
Крезоловый красный
0,005
0,005
0,005
0,005
Пиридоксаль
0,005
0,005
0,005
0,005
L-Лизина гидрохлорид
10,00
L-Орнитина гидрохлорид
10,00
L-Аргинина гидрохлорид
10,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,0 ± 0,2
 
 
 
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 10,52 г порошка М393 в 1000 мл дистиллированной воды. Добавить 10,0 г L-Лизина, L-Орнитина, L-Аргинина или другой L-аминокислоты. При использовании DL-аминокислот применять 2% концентрации. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. В случае добавления L-Орнитина требуется подводить рН. Разлить по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 10 мин. Размешать 20,52 г порошка М687 или М688 или М689 в дистиллированной воде и стерилизовать, как указано выше.

Принцип и оценка результата:

Эти среды используют для дифференциации грамотрицательных бактерий по их способности декарбоксилировать аминокислоты. Декарбоксилазный бульон был разработан Мюллером для определения декарбоксилаз лизина и орнитина и дегидролазы аргинина (1). Ранее бактериальные декарбоксилазы определяли другими методами (2, 3). Определение орнитиндекарбоксилазы помогает дифференцировать клебсиеллы и энтеробактеры. Клебсиеллы неподвижны и не обладают орнитиндекарбоксилазной активностью, а энтеробактеры подвижны и имеют орнитиндекарбоксилазу, за исключением вида Enterobacter agglomerans (4).

Мясной экстракт и пептический перевар животной ткани служат источником углерода, азота, минеральных веществ, витаминов В и других важных факторов роста бактерий. Глюкоза служит источником ферментируемых углеводов, а пиридоксаль – ко-фактором для декарбоксилирования. Бромкрезоловый пурпурный и крезоловый красный служат индикаторами рН. Если засеяны бактерии, ферментирующие глюкозу, появляются кислые продукты, изменяющие цвет индикатора с лилового на желтый. Кислая среда стимулирует декарбоксилазную активность. В результате декарбоксилирования лизина образуется кадаверин, орнитина – путресцин. Аргинин вначале гидролизуется до орнитина, а затем образуется путресцин. Образовавшиеся амины защелачивают среду и ее цвет меняется с желтого на лиловый. Если декарбоксилирования нет, среда остается кислой и имеет желтый цвет. Для контроля каждый испытуемый штамм надо параллельно засевать в среду без аминокислот.

Засеянные пробирки необходимо защищать от воздуха слоем стерильного минерального масла, т.к. в результате ощелачивания поверхности среды могут наблюдаться ложноположительные реакции.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий зеленовато-желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М393 (1,05% вес/об), М687, М688 или М689 (2,05% вес/об) имеют рН 6,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов в течение 4 дней при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Лизин
Аргинин
Орнитин
Citrobacter freundii (8090)
±
±
Enterobacter aerogenes (13048)
+
+
Escherichia coli (25922)
±
±
±
Klebsiella pneumoniae (13883)
+
Proteus vulgaris (13315)
Proteus mirabilis (25933)
+
Pseudomonas aeruginosa (9027)
+
Salmonella paratyphi А
(+) или +
+
Salmonella typhi (6539)
+
(+) или –
Shigella flexneri (12022)
– или (+)
Shigella sonnei (25931)
±
+
Shigella dysenteriae (13313)
– или (+)
Serratia marcescens (8100)
+
+

Примечания:
"+" - положительная реакция, лиловый цвет,
"–" - отрицательная реакция, желтый цвет или без изменения цвета,
"±"- вариабельный результат,
"+" - замедленная положительная реакция.

Ссылки:

1. Moeller V., 1955, Acta Pathol. Microbiol. Scand. 36:158.
2. Gale G. F., 1940, Biochem. J., 34:392.
3. Gale and Epps, 1943, Nature, 152:327.
4. MacFaddin J., 1980, Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria, 2nd ed., Williams and Wilkins, Baltimore.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.