Thayer Martin Medium Base Основа среды для патогенных нейссерий

M413

 

Этот агар с добавками используют в качестве селективной среды для выделения гонококков из патологического материала.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Пептон специальный	23,00
Крахмал	1,00
Натрия хлорид	5,00
Агар-агар	13,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 21,0 г порошка в 450 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить среду до 45°С и асептично добавить 50 мл стерильной лизированной крови, растворенное в воде содержимое 1 пузырька с ростовой добавкой (FD025) и добавку V.N.C. (FD023) или добавку V.C.N.T. (FD024). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Если будет использован гемоглобин (FD022), размешать 21,0 г порошка среды в 250 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Приготовить 250 мл 2%-ного раствора гемоглобина. Стерилизовать обе части отдельно автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45°С, смешать части и асептично добавить селективные добавки, как описано выше.

Принцип и оценка результата:

Вначале Carpenter и Morton предложили среду для выделения гонококков в течение 24 ч (1). Позже было показано преимущество среды с добавлением гемоглобина и дрожжевого концентрата для выделения гонококков (2). Соответственно данная среда была разработана (3, 4) для первичного выделения Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae из материала, содержащего смешанную микрофлору (из глотки, влагалища, прямой кишки, уретры). Для придания селективных свойств в среду добавляют ванкомицин, колистин и нистатин (4), и дополнительно триметоприм (5).

Специальный пептон обеспечивает среду питательными веществами, крахмал нейтрализует токсические жирные кислоты, если они присутствуют в агаре. Гемоглобин является источником фактора Х, а фактор V (НАД) вносят с ростовой добавкой, которая содержит также витамины, аминокислоты, коферменты и другие вещества, стимулирующие рост нейссерий. Ванкомицин и колистин подавляют рост грамположительных и грамотрицательных бактерий, соответственно (6). Нистатин подавляет рост грибов. На этой среде может подавляться рост гемофильных палочек. При посеве материала из ротоглотки на ней могут вырасти некоторые штаммы Capnocytophaga.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,3%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует. После добавления гемоглобина и специальных добавок среда приобретает шоколадный цвет, непрозрачна, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (4,2% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
Neisseria meningitidis (13090)	Хороший или обильный
Neisseria gonorrhoeae (19424)	Хороший или обильный
Escherichia coli (25922)	Подавляется
Proteus mirabilis (25933)	Подавляется

Ссылки:

1. Carpenter and Morton, 1947, Proc. N.Y. State Assoc. Public Hlth. Labs., 27:58.
2. Carpenter et al, 1949, Am. J. Syphil. Gonorrh. Vener. Dis., 33:164.
3. Martin, Billings, Hackney and Thayer, 1967, Public Hlth. Rep., 82:361.
4. Thayer J. and Martin J.E. Jr., 1966, Public Health Rep., 81:559.
5. Martin J.E. Jr. and Lester A., 1971, HSMHA Hlth. Service Rep., 86(1):30.
6. MacFaddin J., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.