Slanetz and Bartley Medium Среда Сланец-Бартли для энтерококков

M612 / M612I

 

Эту среду используют для определения и подсчета энтерококков методом мембранных фильтров.

Рост Enterococcus faecalis на среде Сланетца-Бартли (M612)

 

Состав**:

Ингредиенты	М612 грамм/литр	М612I грамм/литр
Триптоза	20,00	20,00
Дрожжевой экстракт	5,00	5,00
Глюкоза	2,00	2,00
Натрия гидрофосфат	4,00	–
Калия гидрофосфат	–	4,00
Натрия азид	0,40	0,40
Трифенилтетразолия хлорид (ТТХ)	0,10	0,10
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 46,5 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ И НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Перегревание приводит к порче среды.

Предупреждение: Азид натрия имеет тенденцию к образованию взрывчатых соединений с металлами, поэтому рекомендуется использовать много воды для удаления остатков среды.

Принцип и оценка результата:

Эту среду разработали Slanetz и Bartley (1) для определения и подсчета энтерококков методом мембранных фильтров. Ее можно использовать также для прямого посева (2, 3). С небольшой модификацией она рекомендована международным комитетом (4): вместо гидрофосфата натрия рекомендовано использовать гидрофосфат калия.

Эта среда высокоселективна для энтерококков. Азид натрия подавляет рост грамотрицательных микроорганизмов. ТТХ восстанавливается бактериями до нерастворимого формазана, который откладывается в клеточной стенке, обусловливая темно-красный цвет колоний. Все темно-бордовые колонии, появившиеся при повышенных температурах инкубирования (44-45°С) предположительно можно относить к энтерококкам (5, 6). Эта среда официально рекомендована для подсчета энтерококков в воде (7). Исследуемую воду фильтруют через фильтр, который затем помещают на поверхность данной среды в чашках и инкубируют 4 часа при 35°С , а затем 44-48 ч при 44-45°С. Подсчитывают красные или темно-бордовые колонии энтерококков. Предварительное инкубирование при 35°С помогает выделить поврежденные бактерии. Поскольку не все виды восстанавливают ТТХ, необходимо принимать во внимание и бледные колонии.

Пробы пищевых продуктов гомогенизируют и разводят физиологическим раствором так, чтобы получить 15-150 колоний на каждой чашке со средой. Гомогенаты или их разведения распределяют по поверхности агара и инкубируют среду при 35°С в течение 48 ч. Подсчитывают розовые или темно-красные колонии с узким беловатым ободком (3).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, слегка опалесцирует, когда в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (4,65% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 44-48 ч при 44-45°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет колоний
Enterococcus faecalis (29212)	Обильный	Красный или темно-бордовый
Escherichia coli (25922)	Подавляется	–

Ссылки:

1. Slanetz L. W. and Bartley C.H., 1957, J. Bact., 74:591.
2. Burkwall M.K. and Hartman P.A., 1964, Appl. Microbiol., 12:18.
3. Nordic Committee on Food Analysis, 1968, Leaflet 68.
4. International Organization for Standardization (ISO), 1984, Draft ISO/DIS 7899-2.
5. Taylor E.W. and Burman N.P., 1964, J. Appl. Bact., 27:294.
6. Mead G.C., 1966, Proc. Soc. Wat. Treat. Exam., 15:207.
7. Department of Health and Social Security, 1982, Report 71, HMSO, London.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.